蛋白质技术

浏览资源细胞生物学 -- 细胞分子生物学资源列表 (1到10 共96条):休士顿大学生物和生物化学系这是休士顿大学生物和生物化学系的主页。该系有三个专业——生物化学，细胞和分子生物学，生态学和进化。该主页介绍了该系的一些基本情况、教师的研究情况、学生的学习生活、研究环境以及一些友好网站的连接。http://www.bchs.uh.edu 详细资料分子细胞这是著名的杂志的网站，收录细胞分子生物学相关论著，通过免费注册后可以免费看该杂志的文摘 ...

SDS-PAGE相关帖整理（2005年4月到7月）注：已经筛选，主要是得分帖或小生以为有参考价值的帖子。SDS的作用SDS沉淀SDS去除SDS破坏二硫键？上样缓冲液配方SDS不影响制作多抗SDS胶检测蛋白纯度各工作液的保存时间分子量胶浓度和PH切胶免疫动物电泳缓冲液配方组织蛋白提取液各成分作用AP尤应冰箱保存裂解细菌双向电泳电压时间引起的问题条纹上样量不宜太少分离胶不凝的原因确定是否表达和形成包涵体磷酸 ...

Lysis buffer(western)Stock solutions Working Solution working --50ml1M Tris 20mM 1ml5M Nacl 100mM 1ml0.1M EDTA 2mM 1ml1%NP-40 0.5mlWorking solution 5ml 10ml1mM PMSF 50ul(100mM) 100ul25mMNaF 50ul(2.5M) 100ul10uM ALLN 5ul(10mM) 10ul10uM ALLM 5ul(10mM) 10ul0.1mM Sodium Ortho ...

冷泉港有一本很经典的书，叫《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。其中的附录7给出了用亚氨基乙二酸（铁螯合）Sepharose 6B分离磷酸肽的方法。后面有2篇参考文献，最重要的那篇因为发表时间太久远了（Muszynska, G., L. Andersson, and J. Porath. 1986. Selective adsorption of phosphoproteins on gel-immobilizedferric chelate. Biochemistry 25:6850-68 ...

Principles of Gene ManipulationChapter 1 Gene manipulation: an all-embracing techniqueChapter 2 Basic techniquesChapter 3 Cutting and joining DNA moleculesChapter 4 Basic biology of plasmid and phage vectorsChapter 5 Cosmids, phasmids and other advanced vectorsChapter 6 ...

近年来，非编码RNA（即没有被翻译成蛋白质的RNA）在调控基因表达中扮演至关重要的角色已经成为一个清楚的事实。对包括microRNA，siRNA等的非编码RNA的研究更是研究的焦点。这些领域研究的不断的深入也使我们对基础生命物质有了新的了解、认识。近年来，国内外在非编码RNA方面的研究取得了多项令人瞩目的成就。2008年即将来临之际，美国卫生研究院在上周五宣布说，计划在2008年拨款150万美元用于研究非编码 ...

我要做酵母双杂交，有战友在做吗，交流一下，我的QQ446357706，现在我先把我的资料给大家看看吧，我自己写的程序酵母培养：YPD: 蛋白胨20g ,酵母提取物10g ,琼脂20g葡萄糖20g或灭菌后加入葡萄糖（40% 50ml；过滤除菌/121℃,15min）,使终浓度为2%.YPDA: YPD+adenin hemisulfate(0.2% 15ml;对热不稳定，不能高温高压灭菌)，使终浓度为0.003%.SD /:（SD /完全，SD /-./././.）无氨基酸酵母 ...

1.抗体的选择对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），而且说是100微升，但至多 ...

【专家讲座】GE公司於莉女士《定量蛋白质印迹实验的最优化方法》http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=10362930&sty=1&tpg=1&age=01、yaplewang wrote:於莉老师您好，我是丁香园会员yaplewang，我对于您的这次讲座很感兴趣。众所周知，免疫印迹进行蛋白质检测中最后条带结果的检测的可靠性一向备受关注，丁香园蛋白版的不少战友也讨论过这个问题。既往认为 ...

蛋白样品制备一、实验试剂与器材1×PBS，细胞裂解液，组织块，上样缓冲液，细胞刮，移液器，EP管，均浆器，离心机，加热器二、实验步骤事先准备好碎冰，干净的均浆器插在冰上。准备好各种枪头、移液器、EP管、切组织用的消过毒的手术刀、干净的玻璃板和事先准备好的裂解液（根据需要加入合适浓度的蛋白酶抑制剂）↓迅速取出低温冻存的组织块，各样品切取合适大小使称重尽量一致↓将组织低温中研碎，然后倒入EP管，加入裂解液冰上裂解。↓组织被充分 ...

Allen He/何小姐，颂安！我是武汉的一位生物学科研人员，上次在水生所参加过一次您主讲的pet系统讲座，及其相关的内容，并且获得了会上派送的资料，非常感谢，novagen的这本册子对我帮助很大，感谢merck生化组，还有您何小姐给中国生物学工作者所作的努力！那天我在会上问到一个关于kan抗性机理的问题，我说的是kan基因编码一种磷酸转移酶，此酶将磷酸基团转移给卡那霉素，而使之灭活。我的问题是，这种磷酸转移酶是否像 ...

1.根据厂家说明安装玻璃板，用1%热琼脂糖（用1X的电泳液配制，普通琼脂）封闭玻璃板三边间隙，以防灌胶时漏胶。2.在三角瓶中配制8%的分离胶20ml，因为目的蛋白分子量较大，因此用8%的分离胶进行电泳检测；GAPDH 用10%分离胶检测。依次加入各成分，每加一种试剂均要混匀。加入TEMED后，立即快速旋动混合物, 并进行下步的操作。分 离 胶成 分 体积（20ml） 8% 10%水 9.3 8.0430%丙烯酰胺 5.3 6.661.5Mtris(Ph8.8) 5.0 5.010%过硫酸胺 0 ...

2D Gel Electrophoresis ProtocolLysis Buffer7M Urea2M Thiourea4% CHAPSAdd fresh: 20mM Spermine20mM DTT1mM PMSFRehydration Buffer8M Urea 2% CHAPSAdd fresh:20mM DTT0.5% IPG Buffertrace amount of bromophenol blueEquilibration Buffer6M Urea 30% Glycerol 2% SDS 50mM Tris-HCl ...

一、原核蛋白表达及纯化1、怎样提高E.coli中6′His标签蛋白的表达水平？6 × His标签蛋白的表达水平低原因可能为：目标蛋白有毒或不稳定，或者是细菌生长过程中不能维持表达结构。有时候，插入片段的5’端序列编码了干扰转录或翻译的元件（比如有反向重复序列而形成茎环结构，掩盖了Shine-Dalgarno序列），在这种情况下，有必要检查和修改表达序列。改变培养基和宿主菌也可能会有所帮助。外源性蛋白的表达会使宿主菌生长迟缓 ...

http://www.helixnet.cn/bbs/thread-394-1-2.html 酵母表达系统最新研究进展郑立运1 ,方先珍2(1. 中国科学院武汉病毒研究所,湖北武汉430071; 2. 河南省畜牧局兽医防治站,河南郑州450002 )中图分类号816　　　文献标识码:A　　　文章编号: 1008 - 3111 (2005) 04 - 0250 - 04　　分子生物学技术的发展为利用生物反应器生产外源蛋白提供了许多方法和手段。到目前为止,已发展出了大肠杆菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等多种 ...

http://www.cellbio.com/protocols.htmlMethods and ProtocolsThis section lists online resources for cell and molecular biology research protocols. Most of the web sites focus on particular research techniques.Web sites of reagent sources often supply specific protocols ...

各位大大， 最近小妹接到老板的任务， 要对SPITC法修饰研究进行实验， 在参考了大量的文献（15篇左右）， 总结出了如下的流程， 并且进行了实验，我会把我的实验过程和结果贴出来， 希望大家能够共同分析并且提供小妹建议， 谢谢！！以下是我试验的一个protocol，希望各位前辈能指点一下，谢谢！我用BSA（国产）1mg 做样品，大致的流程是：先溶液酶解，然后C18 ZipTip固相SPITC衍生，洗脱冻干后打MALDI。具体步骤如下：（一）溶液酶解：8 M Urea 3 ...

问题 可能原因验证或解决办法1 转膜不充分 膜没有完全均匀湿透； 使用100% methanol浸透膜 靶蛋白分子量小于10,000； 选择小孔径的膜，缩短转移时间 靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值； 可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液（pH 10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液 甲醇浓度过高； 过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同时会使凝胶收缩或变硬，从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度或者使用乙醇或异丙醇代替 转移时间 ...

蛋白质组学研究成功与否，很大程度上取决于其技术方法水平的高低。蛋白质研究技术远比基因技术复杂和困难。不仅氨基酸残基种类远多于核苷酸残基（20/ 4）, 而且蛋白质有着复杂的翻译后修饰，如磷酸化和糖基化等，给分离和分析蛋白质带来很多困难。此外，通过表达载体进行蛋白质的体外扩增和纯化也并非易事，从而难以制备大量的蛋白质。蛋白质组学的兴起对技术有了新的需求和挑战。蛋白质组的研究实质上是在细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离 ...

做了两个月的时间的 western blotting 终于出了比较好的结果。老板让整理出protocol这是写的PROTOCOL大概会有很多错误请大家指正！谢谢先WESTERN PROTOCOLA.Preparation of Samples1.Get the heads of the fly2.Stir them in the lysis buffer(4heads/10ul)3.Add 2XSDS-gel-loading buffer(4heads/10ul)4.Spin at 112 ...