【公告】《定量蛋白质印迹实验的最优化方法》答疑专贴

yaplewang wrote:
於莉老师您好，我是丁香园会员yaplewang，我对于您的这次讲座很感兴趣。
众所周知，免疫印迹进行蛋白质检测中最后条带结果的检测的可靠性一向备受关注，丁香园蛋白版的不少战友也讨论过这个问题。

既往认为最理想的是使用ECL－X光片感光（亦可使用光学探测系统取代X光片）；
但曾经有人认为使用化学显色的方法所得的图像和结果在投往国外杂志时会被拒绝；
与ECL相比，荧光标记具有持续时间长、线性关系好、灵敏度高、可多重检测、系统直接成像等优势，这些都可能促使荧光标记比ECL所得结果更加可靠。

那么您对此的观点如何？目前国际上对荧光标记蛋白印迹的认可程度怎样？是否存在投稿时被要求更换方法的现象？您能否提供几篇使用该方法的代表性的参考文献（名称）以定大家之心？

相信消除了这些顾虑，对荧光标记蛋白印迹的推广也大大有助。

danpiguo wrote:
於莉老师您好，我是丁香园会员danpiguo，我对于您的这次讲座很感兴趣。
我最近在做western的时候一直出现问题，我想向您请教，希望能收到您的回复。我这次新提取的蛋白做western时总是不出条带，连tublin都不出现，后来又用actin来试，条带倒是出来了，但是是在四十多的位置连着出现了好几条带，而且很整齐，但这次的ACTIN我是一抗二抗一块加四度过夜，之后TBST洗三遍后TBS中泡三分钟去爆的光。之前试过一次ACTIN的一抗二抗分开加也是没有条带的，求指教.

yfsq wrote:
成像系统、荧光标记的二抗、低荧光的膜、与荧光兼容的洗液。。。。。
请问一下于丽老师，能比较一下不同方法的成本吗？
如果按最便宜的方案计算，要完善这样的一套系统大概要多少？
谢谢，应该来说我们很熟了：）
蛋白质组学的问题没少给你打电话。

夹竹桃 wrote:
於莉老师您好，我是丁香园会员夹竹桃，我对于您的这次讲座很感兴趣。
我最近在做western的时候一直出现问题，我想向您请教，我做的western时总是模糊条带，想尽办法,也做不出来清晰地条带.偶尔有清晰的条带,但相同条件做,又作不出来.很郁闷!热切期盼您的答复.谢谢!

helloabing wrote:
於莉老师您好，我是丁香园会员helloabing，我对于您的这次讲座很感兴趣。
很好的讲座，再次感谢！
本人有个问题，就是在结果里面经常出现“杂带”，（如下图），请问一下於莉老师对于这个现象您是怎么解释的？出现这个结果的原因是什么？以及有什么好的方法可以排除此类现象？非常感谢！