蛋白质技术

实验室玄学千千万，预测和结果不符占一半。WB 实验是各位艾粉们，时常光顾的一个实验。但就是这样一个初级又常用的实验，却会出现各种稀奇古怪的问题。比如在 WB 实验鉴定蛋白时，我们得到的蛋白质条带大小常常会和预测值有所偏差。这是身患「强迫症」的艾粉们不能忍的。如果是实验出错或者预测不准这种情况，小艾是没办法跳出手机屏幕救你了。但这下面的 5 条准则，艾粉们倒是可以珍藏一下，在遇到蛋白质条带大小和预测值偏差的时候，拿出来分析一下。我们可 ...

重组蛋白纯化基本原则蛋白的分离纯化是生物工程下游阶段一个比较重要的部分，尤其在基因工程重组蛋白的分离纯化中，上游过程的许多因素会直接影响到下游蛋白的分离，充分利用上游对下游的影响，对蛋白的纯化做一个全面的考虑和整体的设计。是否带有亲和标签，His标签，GST标签等，不同的亲和标签选择不同的纯化方案；可能是可溶性表达，可能形成包涵体，可溶性的蛋白往往需要复杂的纯化步骤，而包涵体易于分离，纯度较高，但回收具有生物活 ...

小鼠XX细胞药物干预后两种蛋白的磷酸化酪氨酸水平检测 实验分组：小鼠XX细胞，按下面分组进行药物干预培养，并收集细胞进行免疫沉淀实验。 1正常对照组2高糖组3高糖+E药物4高糖+A药物(25μM)5高糖+A药物(50μM)6高糖+A药物(100μM)7高糖+A药物(100μM)+B药物（1mM）8高糖+C药物(25μM)9高糖+C药物(50μM)10高糖+C药物(100μM)11高糖+C药物(100μM)+B药物（1mM）12高糖+D药物( ...

今天组会后师妹很不开心，因为老板看了她的 western blot 的结果图后一脸严肃的说：你这个差异不明显啊。师妹说怎么就差异不明显了，我觉得挺明显的啊，她凑近电脑屏幕看了看后，又后仰身体拉大了距离进行观察，就差拿尺子来测量条带的长宽了。我被我这可爱的师妹给萌化了，但又不忍心看她愁眉苦脸的样子，于是轻抚摸师妹的秀发，深情的说到：妹妹，给你安利一款软件，轻松搞定 WB 结果表达差异。好了，下面就奉上使用 Gel-Pro Analyzer 对 WB 结果 ...

刚接触 Western Blot 不久的用户，在选购 WB 设备时，经常会遇到仪器选型的问题：为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择，干式和湿式，那么哪种方法更适合我们呢？这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。我们一般会优先推荐大家选购 YRDIMES 快速半干转印系统，因为干式转印速度很快（常规转膜 30-60min，快速转膜 7-10min），操作也简单，并且 YRDIMES 快速半干转膜系统性 ...

柱式法 Minute TM 胞质胞核分离试剂盒操作方法：A． 悬浮细胞样品（包括植物，细菌，酵母和真菌制备的原生质体）1.500Xg，3 分钟低速离心收集细胞，用预冷的 PBS 清洗一次2. 将细胞转移到 1.5 ml 离心管中，3000 rpm 离心 1-5 分钟，弃去上清。3. 按表格 1 加入适量的胞浆提取缓冲液（请注意样品及裂解液的比例，以达到最佳效果）, 涡旋大力震荡 15 秒, 冰上孵育 5 分钟, 混匀. 接转胞质胞核分离步骤。表格 1，不同细胞体积应加入相应体积缓冲液细胞体积（ul） 胞浆提取缓冲液（ul） 胞核提取缓冲液（ ...

脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化物最难分离，具有独特表面性质的带孔径的离心管柱和优化的无表面活性剂的缓冲液系统，可以快速有效的从脂肪组织匀浆中将水油乳化物 ...

膜蛋白具有许多重要的细胞功能，对生物体存在至关重要。他们具有超过60%的药物靶点，占细胞总蛋白的20%-30%。膜蛋白包括完整的膜蛋白，跨膜蛋白和外周膜蛋白。膜蛋白或者附着在脂质双分子层上或者通过疏水，离子或其他非共价与膜周边的完整蛋白结合。使用表面活性剂进行质膜蛋白分离提取效率不高，还有可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用，改变膜蛋白的拓扑结构。在一些下游应用中，例如膜蛋白IP，Co-IP，酶检测，质谱分析实验，使用无表面 ...

WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！这是因为处于不同的细胞生长状况和 / 或特定的细胞周期时，磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分，处理不得当时，还会快速的去磷酸化。磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多，比如封闭问题，抗体问题，或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。然而，有一个常被大家忽视的重要原因就是蛋白样品制备所用的方法是否适合于磷酸化蛋白的提取？其实蛋白质提 ...

IBA 第三代 Strep-tag® 高效蛋白纯化系统，由 Twin-Strep-tag®搭配全新研发出的 Strep-Tactin®XT 组合而成。

这篇综述重点说明使用RIPA裂解液提取总蛋白以及下游实验中可能存在的问题。RIPA裂解液常用于从脊椎动物细胞和组织中提取总蛋白。但是由于蛋白质间有较大的差异和非蛋白成份的干扰，所以从一个样本中同时释放和溶解所有蛋白质是非常困难的。特别是一些整合到膜上的蛋白质，或与其他蛋白质/核酸形成复合物时，就大大阻碍了提取效率。因此可以推断，蛋白质在提取过程中或多或少的与在体内时真实情况不尽相同。经典RIPA裂解液中含有 ...

人体骨骼是人体运动系统的要素，起着支撑身体及保护身体的重大作用，是人体组成不可或缺的部分。骨骼化是生物结构复杂化的基础，骨骼系统又是生物形态进化的限制因素。近日，吉林省公安厅物质鉴定中心采购了上海净信研磨机，用于研磨人体骨骼，进行一系列的研究。图一吉林省公安厅物质鉴定中心图二 人体骨骼样本人体骨骼提取是人体运动分析过程中捕获人体动作的关键步骤,对分析人体的运动姿态,获取人体运动参数有重要意义。吉林省公安厅物质鉴定 ...

脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化物最难分离，具有独特表面性质的带孔径的离心管柱和优化的无表面活性剂的缓冲液系统，可以快速有效的从脂肪组织匀浆中将水油乳化物 ...

大家目前最常用的方法是利用溶液法进行蛋白提取（如 RIPA 裂解液），但是往往会在蛋白质提取中产生两个不同的组分，即 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分。通常 RIPA 不可溶性组分被我们直接丢弃忽略。但是已经有文章证实许多蛋白质存在于被丢弃的 RIPA 不可溶性组分中。也就是说利用溶液法提取的并非是完整的总蛋白，而仅仅是一些可溶性蛋白。溶液法进行提取蛋白时会人工激活 caspase-3 和 caspase-7；还会人工激活某些激酶活性；影响磷酸化研究； ...

Normal07.8 磅02falsefalsefalseEN-USZH-CNX-NONE脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化物最难分离，具有独特表面性质的带孔径的 ...

膜蛋白具有许多重要的细胞功能，对生物体存在至关重要。他们具有超过 60% 的药物靶点，占细胞总蛋白的 20%-30%。膜蛋白包括完整的膜蛋白，跨膜蛋白和外周膜蛋白。膜蛋白或者附着在脂质双分子层上或者通过疏水，离子或其他非共价与膜周边的完整蛋白结合。使用表面活性剂进行质膜蛋白分离提取效率不高，还有可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用，改变膜蛋白的拓扑结构。在一些下游应用中，例如膜蛋白 IP，Co-IP，酶检测，质谱分析实验，使用无表面活性剂的 ...

Western Blot转膜之前免不了要在蛋白质垂直电泳槽中跑胶分离蛋白质。关于制胶，大多数用户还是喜欢用电泳槽配套的制胶器来自己制胶跑电泳，经济实惠。但是很多实验室因为设备已经使用多年，常会发现垂直电泳槽的制胶器没有原来好用了，经常会有“漏胶”或者“漏液”的现象，也就是说，凝胶溶液还没有来得及凝固，就从玻璃板某个周围的某个缝隙“漏”出去了。最糟糕的情况莫过于，漏液速度没那么快，刚加好溶液时看不出来有漏胶或者漏液，而等 ...

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。实验方法原理———底物化学发光 ECL 法Western 免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与 So ...

Western Blot 现在仍然是检测和分离蛋白最常用的一种实验方法，但是要想得到较好的结果并不容易，只有找到合适的实验条件并进行优化，才能以更少的时间得到更多的结果，达到事半功倍的效果！下面是 R&D Systems 品牌为您推荐的免疫印迹优化步骤和实验涉及参考数据：一抗浓度对实验结果的影响抗体：Human/Mouse/Rat RSK1 Antibody (Catalog # AF992)样本：人 HeLa 细胞 (Fig.1)A：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 ...

Toxic, hot, and spicy: Nanodiscs improve membrane protein resolution in cryo-EM毒、热、辣：Nanodisc配合冷冻电镜提升膜蛋白的分辨率(作者：Cube Biotech) Nanodisc结合冷冻电镜应用时，Nanodisc提升了通过冷冻电镜对膜蛋白的解析率，同时揭示了功能性磷脂所扮演的重要角色。The last few years have seen a tremendous increase in high-res ...