蛋白质技术

月亮欣 AFP甲胎蛋白的受体作用机理以及如何证明体内存在其受体最近复习时，遇到的一个历年考题，请各位高手帮助解答，万分感谢！月亮欣 自己顶啊月亮欣 没有人帮忙啊，有专家吗，恳请解答！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

ellen_hu 作为这方面的白痴，实在一团雾水，有没有高手指点一二，把其中的一般流程讲述一下，是我能够形成一个整体的印象，谢谢！！！！！急切！！！chenlinjie686 上nature或者annualreview 查GRK的综述文献...chenlinjie686 丝氨酸苏氨酸的点突变咯本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

PCR352 本人想寻找一个糖蛋白的受体，这个糖蛋白由另个亚基（A和B )组成。但是目前没有这个糖蛋白的产品，只有A亚基原核表达产品，请问可以用这个亚基进行寻找受体吗？freecell 理论上可以。可以考虑用IP和PULL-DOWN找出共同结合的蛋白；随后将A的抗体封闭A，然后进一步分析。PCR352 谢谢，我再考虑一下，实在不行就得做真核表达产物了。dnazyme 这个蛋白的受体作用位点万一是与B亚基其作用呢？其作用的部位到底是 ...

Cherrybei 请教各位高手，“ timing of cotranslational folding”该如何正确翻译？？谢谢！！！新年快乐！freecell 根据这个句子：We hypothesize that the presence of a rare codon, marked by the synonymous polymorphism, affects the timing of cotranslational folding and insertion of P-gp into the membrane, thereby alt ...

yysghyy 请问各位高手，1）除了质谱分析还有什么办法可以确定某个蛋白的磷酸化位点；2）还有如果知道了这个磷酸化位点怎样可以抑制其磷酸化(研究其下游信号通路）？3）我研究的某个受体具有酪氨酸激酶区域，也知道了几个磷酸化位点，但是研究发现其酪氨酸激酶活性并不高，这是什么意思？是说其磷酸化位点不易被磷酸化，还是可以磷酸化，但激活了另外的信号通路？非常感谢！narcissus27 回答问题2，可以将这个位点突变成其他氨基酸， ...

biozk 一抗都是cst的，二抗对照也没有问题，细胞裂解液里有磷酸化酶抑制剂，请问可能是哪里的问题？谢谢。msniu 你说的是正常现象啊。erk细胞内本来就有很多，可以检测到，而p-erk是激活后才有的，有的细胞p-erk是激活的，有的细胞p-erk不是激活的，需要刺激激活。不激活的检测不到。你要是怕实验操作有问题，可以做个用EGF激活的做阳性对照。还有一种情况是，你细胞的erk磷酸化水平低，曝光时间短了，信号没显出来。ma ...

yaojodan 怎样除掉蛋白中的核酸freecell 核酸酶降解。分子筛纯化。雪中梅 可以参照上世纪初关于到底是蛋白还是核酸是遗传物质的争论中所采用的方法。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

linghe82 为什么蛋白在肿瘤里有表达而在肿瘤细胞中却检测不到?freecell “在肿瘤里有表达”是什么概念？是怎样检测到的？linghe82 We have screened a large number of human ovarian cancer cell lines for expression of MUC4. Our recent study showed that MUC4 is expressed in above 95% of ovarian tumours (Chauhan et al,2006); however, it was ...

dahaixiaodao 关于组蛋白去乙酰化酶HDACs在Tregs的发育和功能。谢谢！TGFβ-b induces chromatin binding and promoter occupancy of acetylated Foxp3 on the IL-2 promoter.zhujoker 这句话的大概意思是TGFβ-b诱导乙酰化的Foxp3结合于染色体上从而占用了启动子结合区，也占用了IL-2的启动子区域，从而抑制IL-2的转录。背景介绍一下：其实在正常情况 ...

lisha2008 NF-KB65磷酸化位点怎么选择啊?本人是实验研究某药物抗炎作用抑制NF-KBP65活化的.lisha2008 怎么没有人啊michaelmichael 你可以在网上搜索识别65位磷酸化的抗体，用于检测药物作用前后该位点磷酸化水平的变化情况。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

bigyugg825 我想知道HIV中p24蛋白的三级结构和相关的一些参数，该怎么去找呢，还是需要什么特别软件？谢谢了gingivalis chack at here: http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do如果 你找不到，把序列贴出来我看看。bigyugg825 gingivalis wrote:chack at here: http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do如果 你找不到，把序列贴出来我看看。我在 ...

tasthma 请问有没有那位战友用过activ motif 公司的核转录因子活性检测试剂盒TransAM p65啊？我想请教一下，是不是一定要做标准曲线啊？zhujoker 这种试剂盒一般都是需要做标准曲线的。tasthma 谢谢版主！那我还得买他们的标准蛋白才行啊zhuqueleee 没有必要的。我当时用的就是这个试剂盒，因为到最后数值都是以OD值表示的，而且试剂盒里面附带有核蛋白和竞争性Oligo作为系统的阳性阴性对照。而且提 ...

andrew240 请问单独的GFP（绿色荧光蛋白）由内质网核糖体合成，然后进入高尔基体吗？还是在胞浆核糖体合成？有没有相关文献证明这个的？我想找一个确定不在内质网合成的蛋白作为对照，不知GFP合不合适。谢谢loneman 根据我看的教科书好像蛋白都是在内质网核糖体上翻译的吧？zhujoker 我也看看了相应的知识，感觉是长进不少，但是有一点可以确定的是蛋白质都是在核糖体上加工出来的，但是没有相应的知识提供出到底是胞浆中 ...

yulanxin 最近在做荧光素酶双报告系统的实验，结果发现，用pcDNA3.1 overexpression我的目的蛋白后，随着目的蛋白剂量的增加，luciferase和Rellina的荧光值都有提高。由于该目的蛋白和许多mRNA的相关蛋白均有关系，因此我们推测该蛋白可能稳定了报告基因mRNA的寿命，导致其翻译水平的增加。但是，也有可能它是在转录水平促进了启动子的非特异性转录导致报告基因的mRNA水平增加，因此，想 ...

guaiguainiehui 采用双报告基因，我和一位师兄做不同的寡核苷酸跟不同的基因的3‘utr作用。比如mir-1 and pmir-report-A3'UTRmir-1 and pmir-report-B3'UTR为什么我按照师兄的各个量转染，renilla的数值我们差不多，但是目的的数值，我的是overload,师兄的却比较小呢？难道跟构建进去的3’UTR有很大关系吗？谢谢！另外，附带问一下，3；UTR采用合成几十bp的寡核苷酸， ...

xjoak 比如我们用非特异性的筛选方法筛到一个与肿瘤细胞相结合而与正常细胞不结合的抗体，但我们不知道该抗体的靶蛋白是什么，那么可以用一些什么技术筛到该抗体的靶蛋白呢？多谢！freecell 酵母双杂交、免疫共沉淀，应该都可以吧。xjoak 多谢，酵母双杂交应该可以，免疫共沉淀可能不行，因为靶蛋白是未知啊！还有其他方法吗，？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 ...

三七家园 呵呵，希望大侠们，大牛们，前辈们不吝赐教。。。。:Plicanming 可以讲具体一点吗？三七家园 谢谢楼上的关心，我现在要检测pkc三个亚基δ,ε,ζ在用0.2uM的PMA（pkc的激动剂）后如何被激活？（是被磷酸化呢？还是蛋白量表达增加？或者别的什么？）怎样检测这种激活？（如果是前两个，我想用western blot因为我现在只会这个技术）ffyy8888 哈哈，技术很多呢，WB是经典金标准，但是现在还有很多新的方法，哈哈哈哈，其中 ...

mrliuw 提问：一个蛋白单体没活性（或者说很低），发挥作用需要形成同源二聚体并发生自体磷酸化，但是在对照和实验组之间没有发现有统计学意义的表达量差异，请问做过类似研究的同行，应该如何开展研究？（比如从定位，修饰变化等等）mrliuw 这个是已有文献报道的，在细胞内完成。如果能得到天然的二聚体体，下面要如何开展研究呢？freecell 如果能得到天然的二聚体体,你的研究目的是什么呢？只有知道了研究目的，才能探讨研究手段吧？m ...

orgachem 各位哥哥姐姐，大家好！我想请教一个很简单的问题，但是我确实不知道，让大家见笑了。问题如下：蛋白和蛋白质是同一种物质吗？如果不是的话，二者主要有什么区别 ？:)谢谢各位！阳光海岛 关键看这个“蛋白”是指什么东西了。蛋白质是由氨基酸组成的大分子，其水溶液在冻干除水之后，留下的固体粉末就是了蛋白质。“蛋白”呢，意思很多，如果说指的是鸡蛋的“蛋清”的话，那基本就是一个蛋白质的水溶液吧，煮熟只是蛋白质变性了，凝固了。（没做过实验 ...

kimmileecn 我现在在做有E-cadherin的课题，其中要涉及使E-cadherin不表达，请问除了RNAi，还有其他方法吗？谢谢iscience 教材上没有。本人总结的文献上的方法有：1、构建突变体 ，单点或者多点突变，使之缺失；2、使用特异性抑制剂；3、使用该蛋白的特异性单抗或者多抗，封闭该蛋白的作用；4、使用与该蛋白性质相近的分子，使之与该蛋白竞争性发挥作用；...zhyu8221 lz肯定是在动物或者细胞水平，除了干 ...