PCR技术

荧光定量PCR仪在国内市场推广从98年开始已经经历了6年，从开拓者PE（ABI）到ROCHE,再到后来鱼龙混杂，各种荧光定量PCR仪纷纷登陆我国市场，使得中国市场成为世界上最为繁荣的荧光定量PCR技术应用市场，笔者由于从一开始就从事该项技术再中国的推广，就亲身经历的几种仪器来谈谈他们的优缺点，抛砖引玉使大家在应用这项技术的过程中提供一定的帮助。荧光定量PCR仪的鼻祖是PE7700（ABI公司推出）。而后从其进 ...

第一章 PCR和RT-PCR基础PCR基础聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。模板可以为纯化的基因组或质粒DNA；由RNA转化得到的cDNA；或未经纯化的粗制生 ...

EB是否致癌http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=314272&sty=1&tpg=48&age=0EB浓度的讨论http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=755857&sty=1&tpg=11&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=718917&sty=1&tpg=1&age=0http://www.dxy.cn ...

钓基因的过程中的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=426195&sty=1&tpg=8&age=0PCR的方法作STR的分型http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=632509&sty=1&tpg=8&age=0RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=6 ...

一家之说，欢迎指教！1．简介寡聚核苷酸引物的选择，通常是整个扩增反应成功的关键。所选的引物序列将决定PCR产物的大小、位置、以及扩增区域的Tm值这个和扩增物产量有关的重要物理参数。好的引物设计可以避免背景和非特异产物的产生，甚至在RNA-PCR中也能识别cDNA或基因组模板。引物设计也极大的影响扩增产量：若使用设计粗糙的引物，产物将很少甚至没有；而使用正确设计的引物得到的产物量可接近于反应指数期的产量理论值。当然 ...

以前受到很多朋友的帮助，尤其是各位老版主老前辈还有各位不知名（指的是园子里无名）的高手，看到众位版主尤其是新版主PCRfan在大洋彼岸也如此热情，真是很感动。但今天又看到还是有很多朋友在愁引物设计问题，特发此贴，非原创，转自37度，稍加修改，请笑纳。注：本人非分生pro，如有错误，请勿诉讼我，可以回贴指正。PCR 引物数据库　　PCR 引物数据库是一个新的数据库，它可以提供各种有关引物的测试，进行最佳引物 设计。你可以浏览以下几部分:　　_A_...

小弟接触简并引物PCR已经有一段时间了，虽然说不上是老手，但是至少不是新手了，对于简并引物PCR有了初步的了解。在dxy里，看了很多这方面的帖子，逐步认识了这个试验。但是我在试验过程中发现，还是有很多的问题我解决不了，我曾经发过关于简并引物PCR的帖子，但是回答的人几乎没有，我不知道是这个试验本生就很难，还是什么别的，我反正觉得特难！我的模板是细菌基因DNA，我用生工的UNIQ－10柱式kit，得到的基因组DNA ...

RNA很脆弱,小心操作哦:实验中的一些好习惯加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用 ...

从用PRIMER premier设计引物到查看您所设计的引物会不会有目的产物，以人的APP基因为例1、打开pubmed http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/ ，在search的下拉菜单中选择 Gene或者直接打开这个链接http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene2、输入 APP （或者其他的 待测基因名称或者缩写均可，以下均以APP为例）；点GO，出来的结果是各个物种的APP基因，人的排在第一个 ...

实时荧光定量PCR——一种科学准确的定量方法实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。本文试就其定量原理、方法及参照问题作一介绍。一. 实时荧光定量PCR原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧 ...

SSCP原理：sscp称为单链构象多态性，它是基于DNA构象来检测PCR产物单链碱基微小差异的方法，因其检测敏感，快速和所需装置简便而在分子生物学各个领域广泛应用。但该方法的试验结果受多种因素的影响，如：PCR产物，温度，电压，PAGE胶的浓度和交联度等，因而重复性比较差。因此在做SSCP时要注意各种条件的一致性。如果有酶切位点的话最好用RFLP方法检测DNA 多态，或是用SSCP与RFLP两种方法相结合，试验结果 ...

http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=155886&sty=1&tpg=63&age=0很小的一个软件，也许会有用。可以预测PCR结果，模拟产物电泳效果。序列同源性的分析：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=203297&sty=1&tpg=59&age=0序列分析和多序列比较BLAST Web sitehttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/ ...

昨天找出了这篇关于Real-time PCR数据统计的文章，被引用了1000多次Livak, K. J. and Schmittgen, T. D. Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2−ΔΔCT Method Methods. 25, 402, 2001.Abstract:The two most commonly used methods to analyze data from real-time, quantitat ...

面对如此功能强大的两个引物设计软件，不知如何使用确实难事！Oligo使用方法介绍作为目前最好、最专业的引物设计软件，Oligo的功能很强，在这里我们介绍它的一些主要功能：如：普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估引物对质量等等。在正式进行引物设计前，我们首先面临的一个任务就是向Oligo程序导入模板序列，根据不同的实验情况，导入模板有三种方法：1， 直接用键盘输入：a， 点击file菜单中的New Sequ ...

先谈引物设计原则，再讲实施方法。引物设计不仅对引物有要求，也对PCR target有要求。Design guidelines for primers:Primers:1 length18-242GC content35%-65%(ideally 40-60%)3Tm60-70°C (ideally 65°C), so that annealing temperature is 58-62°CΔTm (forward primer and reverse primer)

Real-time qPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手由于Real-time qPCR的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验，也基本上被real-time qPCR所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测，很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测，不知从何入手；甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑，不知 ...

如果大家在用TaqMan做SNP genotyping，应该知道试剂有多贵。有兴趣可以看看这篇文章，一种新的SNP genotyping方法。简单而实用。Biotechniques. 2005 Dec;39(6):885-93. Related Articles, LinksHigh-throughput SNP genotyping by single-tube PCR with Tm-shift primers.Wang J, Chuang K, Ahluwalia M, Patel S, Umblas N, M ...

PCR enhancer· DMSO and glycerolRecommended by a number of authors to improve amplificationefficiency and specificity of PCR. However, in the multiplex reactionthese enhancers gave conflicting results. For example, 5% DMSOimproved the amplification of some products , decreased ...

这是我目前见到的关于real time的最全诠释的书籍。也很新，是2006年的。我基本上已经读完，获益匪浅。目前自己的试验涉及这个方面。希望与大家多交流。我在园子里搜到有人发了这篇文章的网址，不过还是有不少朋友打不开。我把它的pdf放在163邮箱里了，用户名：dxy1_2009@163.com密码：dxy123456。需要的朋友直接下载就行。能不能给加分也不重要，重要的是对大家有用。不过要是能有一分的奖励，那就更高兴了 呵呵 ...

PCR相关经验分享PCR常见问题-分析及对策(无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性)问题1：无扩增产物现象：正对照有条带，而样品则无原因:1.模板:含有抑制物，含量低2.Buffer对样品不合适3.引物设计不当或者发生降解4.反应条件：退火温度太高，延伸时间太短对策:1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量2.更换Buffer或调整浓度3.重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物4. ...