PCR技术

实时定量PCR (qPCR)的优势· 实时检测PCR反应过程· 精确计算出每个循环的PCR产物量· 扩增和检测同时进行· 消除后续PCR的干扰在实时定量PCR反应中，杂交探针与插入染料如SYBR Green相比是更好的选择。荧光标记探针可以提高实时定量PCR结果的效率、灵敏度和特异性。而且定量PCR可以在一个反应里同时检测多个目标基因。实时定量PCR的应用· 基因表达分析· 转基因检测和定量· 病原体检测和定量· 基因型/ SNP分析· 突变检测多重PCR分析 ...

引物序列的特异性是决定PCR特异性扩增的主要因素。现在我们常用引物设计软件来进行引物设计，但如注意到以下条件将会事半而功倍：1.引物长度在15～30 bp为佳，过长的引物与模板复性杂交速率减慢，降低扩增效率，过短则会降低特异性。2.引物内部不应形成二级结构，两引物之间不能互补。3.碱基应随机分布，（G+C）%最佳含量在45%～55%，应避免4个以上的相同碱基排列。4.引物3’端和模板的碱基最好完全配对，而引物3’端最后5～6个核 ...

实时荧光定量PCR技术（Real-timequantitativePolymeraseChainReaction简称RealTimePCR）是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。于1996年由美国Appliedbiosystems公司推出，是指对DNA或经过反转入（RT-PCR）的RNA通过聚合酶链式反应并实时监测DNA的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异D ...

转基因大米中Bt基因检测2014 年7 月，央视日前报道了湖南、湖北、安徽、福建等4省存在转基因大米的新闻，引发社会极大关注。记者在武汉市一家大型超市，随机购买5种大米。经检测后发现，这5 种大米中，有3 种含转基因成分：Bt63。Bt63 是一种抗虫害的基因，它是苏云金芽孢杆菌基因中的杀虫晶体蛋白基因，可以有效防止鳞翅目等多种有害昆虫。近年来转基因事件层出不穷，时有耳闻。那什么是转基因呢？转基因技术是提取特定生物体基因组中所需要的目 ...

不知不觉几年下来自己也快毕业了，感谢丁香园这些年来的帮助。没有什么可回报的东西，就发个帖教教新人如何设计引物吧，尽量做到手把手的教，图文并茂。引物设计的帖子不少，以前很多战友会推荐Oligo、PrimerPremier、DNA man等等软件。这些软件设计完最后还是要去BLAST比对下，所以我教大家一种易懂实用的在线设计方法，觉得好的话请投个票。就以人的PTEN基因为例，首先你要找到他的基因序列，如果你要用的是cD ...

作者Sharla M. Peters1, Yolanda L. Jones1, Frank Perrella2, Tai Ha3, and Haile F. Yancy11U. S. Food and Dru g Administration, Center for Veterinary Medicine,Office of Research, 8401 Muirkirk Road, Laurel, Maryland 20708, USA. 2U.S. Food and Dru g Administration, Center for Dru g Evaluation andResear ...

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析，分析的都是PCR终产物。但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经PCR信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基 ...

在论坛上看到不停地有人在问RT-PCR的问题，实际上在以前的帖子中各位香主和eeflying（我为什么总是提他们？因为还是很佩服的哦，生怕自己说错了，被他们指出来哦）都谈到了很多，鄙人也充大头答了一些问题，但是还是有各种问题，由于的基因表达还有点实战经验（但也技止此而），所以想写点东西给大家参考，计划把包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR都写了，但是实在时间不 ...

1、Allele-specific PCR：等位基因特异性PCR，设计引物时选择在基因组的多态性区域，使等位基因的突变定位在（或接近）引物的3'端，在严谨的反应条件下，存在错配碱基的引物不能起始复制，而只有完全匹配的引物才能起始复制，产生的产物因此显示不同的基因型。2、Assembly PCR(也称作Polymerase Cycling Assembly或PCA)：组装PCR通过使用多个具有短重叠区的长的寡核苷酸来合成长的DNA ...

在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口，Copy目的序列在输入框内（选择As），此窗口内，序列也可以直接翻译成蛋白。点击Primer，进入引物窗口。此窗口可以链接到“引物搜索”、“引物编辑”以及“搜索结果”选项，点击Se ...

一、利用ncbi搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列因为密码子的关系，不同的核酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez检索系统，查找到一条相关序列即可。随后利用这一序列使用BLASTp(通过蛋白查蛋白)，在整个Nr数据库中中查找与之相似的氨基酸序列。二、对所找到的序列进行多序列比对将搜索到的同一基因的不同氨基酸序列进行多序列比对，可 ...

Question

This procedure was first described by Bertrand et al (Proceedings of the National Academy of Science USA (1993) Vol. 90 pp. 3496-3500, and Nucleic Acids Research (1994) Vol. 22 pp. 293-300) to demonstrate that ribozymes could be enzymatically active in vivo. We adapted the method to show that certain o ...

This protocol uses C. therm. Polymerase One-Step RT-PCR system from Roche. 1. Setup master mix 1: 25 mM dNTP0.8 mlDMSO2.5 ml100 mM DTT2.5 mlRNase Inhibitor (40 U/ml)0.5 mlf

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Detection of Alu by PCRA Human DNA Fingerprinting Lab Protocol1994 Cold Spring Harbor LaboratoryDNA Learning CenterIn this experiment, polymerase chain reaction (PCR) is used to amplify a nucleotide sequence from chromosome 8 to look for an insertion of a short DNA sequence called Alu wit ...

M13 Forward(-20)5’d3’M13 Forward(-40)5’d3’M13 Reverse5’d3’T7 Promoter5’d3’T3 Promoter5’d3’Sp6 Promoter5’d3’M13/pUC Reverse5’d3’M13/pUC Forward5’d3’ 上一篇：如何设计引物 下一篇：实时PCR/RT-PCR解决方案

a) Primers: i) Oligonucleotide primers are generally supplied as "so many OD units/ml" - but what does this mean, in terms of mg/ml, or mmol/ml, etc? Given: a primer is Y nucleotides (nt) long; Given: the MW of ssDNA is (330 daltons per nt) x (length in nt) (Sambrook et al., 1989; p. C.1); Given: the concentration of primer (=ssD ...

Materials: Taq (or other) PCR enzyme (5 Units/ul) PCR enzyme reaction buffer Distilled water (nuclease free) DNA to be used as template, such as GAPDH template from Clontech DNA to be used as upstream and downstream primers, such as the corresponding primers set for GAPDH template from Clontech Lig ...

Materials: sterile water10X amplification buffer with 15mM MgCl210 mM dNTP50 μM oligonucleotide primer 150 μM oligonucleotide primer 25 unit/μl Taq Polymerasetemplate DNA (1 μg genomic DNA, 0.1-1 ng plasmid DNA) in 10 μlmineral oil (for thermocyclers without a heated lid 1. Combine the fo ...