PCR技术

实验中，通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素，这样，一次筛选可以判断出：未转化的菌不具有抗性，不生长；转化了空载体，即未重组质粒的菌，长成蓝色菌落；转化了重组质粒的菌，即目的重组菌，长成白色菌落。目前很多实验室省去蓝白斑筛选的步骤，造成IPTG和X-Gal滞销主要是蓝白斑筛选存在假阳性的情况，IPTG和X-Gal的购买、配制、涂布也增加了实验的步 ...

第一个：LOCUS AY651315 1275 bp mRNA linear INV 22-AUG-2004DEFINITION Plasmodium falciparum isolate 2300 putative chloroquine resistancetransporter (crt) mRNA, complete cds.ACCESSION AY651315VERSION AY651315.1 GI:51317937KEYWORDS .SOURCE Plasmodium falcipar ...

简并引物设计实际操作步骤 启因生物一、利用ncbi搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列 因为密码子的关系，不同的核酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez检索系统，查找到一条相关序列即可。随后利用这一序列使用BLASTp(通过蛋白查蛋白)，在整个Nr数据库中中查找与之相似的氨基酸序列。二、对所找到的序列进行多序列比对 将搜索到的同一基因的不同 ...

杭州公立的男科医院有哪些【浙江省军区医院咨询QQ2641143845 电话0571-87923139】性爱的目标是让双方都获得快感和愉悦，时间不是那么重要，只要合理分配性爱时间，哪怕仅有十多分钟，都能让双方达到高潮。专家介绍说，完整的性爱包括三部分，前戏、实质性交和后戏。总的来说，性爱时间因人、因时而异，一般在二三十分钟左右即可。从时间分配上看，可以遵循2∶3∶2的原则。以20分钟为例，前戏应占6分钟左右，实质性爱为八九分 ...

最近做了CHIP，用Q-PCR方法进行定量分析，现将我对一些文献资料的总结传上，希望对大家有帮助！i. Normalizeeach ChIP DNA fractions’ Ct value to the Input DNA fraction Ct valuefor the same qPCR Assay (ΔCt) to account forchromatin sample preparationdifferences.ΔCt = (Ct - (Ct -Log2 (Input Dilution Factor)))Where, Inp ...

本内容需要回复后才能下载！ 本书版权归作者所有，请于下载后24小时内删除分子克隆实验指南第3版（高清英文版）(molecular_cloning)protocol名称Molecular cloning: a laboratory manual. Vol. 2Molecular Cloning: A Laboratory Manual第 第 1 卷 卷, David William Russell作者John J. Sambrook, David David William Russell版本3, 插图版出版商 ...

PCR 引物设计及软件使用技巧摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件，而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。关键词：PCR；引物设计中图分类号：Q524 文献标识码： 文章编号：1自从1985 年Karny Mullis 发明了聚合酶链式反应以来，PCR 技术已成为分子 ...

甲基化是目前的研究热点，就我所做的一点工作并其中一点心得，与大家分享。希望能够对大家有所帮助。第一部分 基因组DNA的提取。这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA应该是完整的。此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者 ...

REAL-TIME 引物设计与是否跨内含子的检测方法1.园子里最详细的检测引物是否跨内含子的流程2.提供多图显示如何找到基因外显子与内含子3.如何最简便设计跨内含子的引物（利用primer-blast）感谢隔壁的山西人提出这个问题，以及丁香园，google，百度，PUBMED提供解决问题的方法和线索供我拼凑整理。问题一：如何在pubmed上找到目标基因的DNA序列以及其内含子和外显子情况。步骤：打开NCBI主页面，选 ...

要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c： ...

放到“精华”帖子中，以期能进一步深入讨论。请大家积极发言，谈谈自己的体会。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction ,PCR)是一种利用耐热的DNA聚合酶在体外扩增DNA的方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。当DNA长度小于2kb时，一般PCR反应都问题不大，均较容 ...

第五节　PCR各处应用模式　　一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR　　密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异性越强，设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，针对兼并的混合引物已成功地用于未知靶DNA的扩增、克隆和序 ...

实时定量PCR完全手册方法简介所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。RT-qPCR是由三个步骤组成:1. 反转录:依赖反转 ...

1 关于pcr 引物设计(王艳秋介绍)http://www.dxy.cn/bbs/user/download/649137/PCR引物设计.vip2 PCR引物设计的一些技巧http://www.dxy.cn/bbs/thread/10701443 PCR引物设计及软件使用技巧http://www.dxy.cn/bbs/thread/2446954因特网上免费在线PCR引物设计介绍http://www.dxy.cn/bbs/user/dow ...

寡核苷酸的优化设计郑仲承( 中国科学院上海生命科学院生物化学和细胞生物学研究所，上海 200031 )在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中，都需要使用寡核苷酸作为探针或引物，而对这些反应的质量起最重要影响作用的，就是这些寡核苷酸探针或引物。用优化的寡核苷酸进行实验能够很快得到好的结果，而用不够合适的寡核苷酸时，常常得出似是而非的结果，不仅大大增加了后续实验的工作量，还可能一无所获。怎样优化设计 ...

荧光定量PCR技术研究进展多聚酶联反应（PCR）可对特定基因进行扩增，因此被广泛应用于获取特定基因或基因片段及临床基因诊断等领域。早期最成功及普及的应用领域是获取某一目的基因，用于基因诊断有许多局限性，主要有两点，一是不能准确定量；二是由于太灵敏，容易交叉污染，产生假阳性。为克服上述不足，人们采取了许多方法，如杂交法、竞争法、酶联法及尿苷酶降解法等，但均不很成功，直到最近荧光能量传递技术（FRET）就用于PCR定量 ...

从同学那里copy的，与大家共享：增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GCe. 避免3'端的互 ...

Methylation-Specific PCRProtocol written by James HermaundefinedMethylation-specific PCR (MSP) is a simple rapid and inexpensive method to determine the methylation status of CpG islands. This approach allows the determination of methylation patterns from very small samples of DNA, i ...

神奇滤布（Miracloth)上海开米化学有限公司性能参数产品名称： 神奇滤布（Miracloth)英文名称： 神奇滤布（Miracloth)产品货号： 1363488产品规格： 原装试剂级别： 生化级产品产地： 原装品牌商标： 原装供应商： 上海开米化学有限公司价 格： 1200元保存与运输： 干燥保存现货状态： 干燥保存产品更新时间： 2008-6-23 21:19:00详细资料： 实验方法技术资料更多信息：公司展示页面诚信指数：5点浏览人数：46联系我们： 供应商联系卡上海开米化 ...

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