PCR技术

发表在Nucleic Acids Research, doi:10.1093/nar/gkn294Advance Access published online on May 16, 2008文章地址 http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/abstract/gkn294v1摘要：Bisulfite sequencing, a standard method for DNA methylation profile analysis, is widely used in ...

TITLE Organization and structure of the mouse interleukin-2 geneJOURNAL Nucleic Acids Res. 12 (24), 9323-9331 (1984)PUBMED 6240025COMMENT PROVISIONAL REFSEQ: This record has not yet been subject to finalNCBI review. The reference sequence was derived from X01772.1.On or before Dec 1 ...

各位大侠，我想用RTPCR方法来做水稻HSP70基因的表达，但是水稻的HSP70很多不知道选哪个好，就选了这个，另外我用这个基因的CDNA做了BLAST后发现其500BP和1900bp之间和其它的HSP70基因是相同的，我想设计个500BP和1900bp之间的引物就可以把所有的HSP70基因的表达鉴定出来了，是这样吗但是不知道如何来选择设计引物，哪位帮忙来设计一下AK065431. Oryza sativa (jap. ...

Primer of Genetic Analysis: A Problems Approach, 3rd ed Product Details»Book Publisher: Cambridge University Press (01 October, 2007)»ISBN: 052160365X»Book author: Jr, James N. Thompson, Jenna J. Hellack, Gerald Braver, David S. DuricaThis third edition of a student-tested primer prov ...

引物（primers)：引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。引物的重要性：在整个PCR体系中, 引物占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合，不与其他非...关键词：要点注意设计结构模板延伸引物（primers)：引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个 ...

某基因的序列如下，我设计了一对引物，5 TCGGTTTTCACTGGTTCTCATCC 33 T CGCACTCCTTTCTCTCGCAATG 5想扩增的目的片断是3629－4799 （1170 bp，）不知道能否，请大侠们帮忙看一下，3601 ttttttaatt tcaggatatg gagcttcttc ggttttcact ggttctcatc cagtcctggc3661 tgaccccagt gcaataccta agcaaggtgt ttacaaacaa cc ...

我合成了好几对引物都因为产物的GC含量极高达74%,都没有成功,我又合成了一对引物,没有加酶切位点,想如果能P 出来就回收做摸板,大家请帮我看看,引物设计可行吗?上游引物:5-ATGGCGGGCGTCTGCTCTCCACCTG-3下游引物:5-CCACCTTGAAGTCATTCTCCAGGCGGC-3如果 不行,请大家帮我设计一下引物,感激不尽!我已经做了快半年了.郁闷啊!产物序列:1 tgcagcggtt ctggatggcg tta ...

我依据所查的资料，用primer.0设计了以下引物，上游：TGGGACACTGATGAGGGATA 下游：GGCACAAGGCAGACAAAT其中下游链存在错配，这是否会影响扩增结果。麻烦各位看看整体设计否合理？？附：D63902. Reports Mus musculus mRNA... LinksLOCUS MUSEFP 5475 bp mRNA linear ROD 29-MAY-2002DEFINITION Mus musculus mRNA for estrogen-res ...

一提RT-PCR，我便黯然泪下。我参考了一篇外文，用了他的引物，并且这个引物在PRIMER5.0也验证了存在。做了三个月了，却总有非特异性条带，而且比目的条带还要亮。调了很多条件，什么退火温度，镁离子，用OLIGODT，随机引物，下游引物，AMV，MMLV反转录，加DMSO，都不行。做了对照，应该没有污染。发信过去问了原作者，他说他做的没问题。可我偏偏做无法达到只有特异性条带，终于下定决心去测序，结果更是给我一重重的打击。 ...

引言　　聚合酶链反应PCR使不同来源的特异核酸片段的分离及分析发生了革命，但应用PCR分 离，分析特定DNA区域需要了解靶区域的边侧序列，这使扩增局限于已知DNA序列。我 们研究了从复杂的人和其他种DNA混合物中扩增未知DNA序列。特别是，我们应用PCR 分离出了在啮齿类细胞背景中含有人染色体片段的体细胞杂合体中的人DNA。使存留 在杂合子中的人特异区域序列得到分离和鉴定，避免了克隆DNA库和用人特异重复序 列探针他离人序列克隆。 ...

PCR引物设计的11条黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA ...

Making the T-vector:1.Digest 5 ug of vector DNA ( pBluescript ＆ pUC18) with a restriction enzyme that generates a unique blunt end site, for example EcoRV or Sma I ( we prefere EcorV for it's stable activity at 37 C) for 2 hours at 37 C.2.Run the digest on a 1% low-melting-point agarose (use TAE as buffer, because the boric ...

求助 帮设计引物求助 哪为高手帮我设计一下以下序列引物 要求 长度大于等于20bp 上游引物最好在1－100 下游1449－2046 不需要酶切位点 谢谢ggctccgcagagtgaccctttttcttggaaaagcggtggcgagagaagtgaaggtggctgttgggtagggagtcaagactcctggaaggtggagagggtggcgggaggatgagctcgccgggcacagagagcgcagggaa ...

我打算用人的heme oxygenase-1cDNA做目的基因做基因治疗.用RT-PCR从mRNA得到我的目的基因.heme oxygenase-1基因序列如下:1 tcaacgcctg cctcccctcg agcgtcctca gcgcagccgc cgcccgcgga gccagcacga61 acgagcccag caccggccgg atggagcgtc cgcaacccga cagcatgccc caggatttgt121 cagaggccct gaag ...

“赏精彩美图 享学术盛宴”第二届罗氏HRM美图网络评选活动展示你喜欢的HRM精彩美图；分享你掌握HRM技术过程中的实验心得；即有机会与HRM技术的发明者Carl教授近距离接触；更有多种趣味有奖活动，邀您参加，赶快行动吧，进入专区本期主要活动如下：1、分享精彩HRM美图 享终极学术盛宴参与方式：点击“活动申请表”下载后填写完整，发送至邮箱：lhy@dxy.com获奖说明：HRM美图评选优胜者将有幸作为特邀嘉宾出席在北京、上海 ...

我要做RT-PCR，其基因的mRNA序列为:CDS 1..7671ORIGIN1 atgccgccgc tcctggcgcc cctgctctgc ctggcgctgc tgcccgcgct cgccgcacga61 ggcccgcgat gctcccagcc cggtgagacc tgcctgaatg gcgggaagtg tgaagcggcc121 aatggcacgg aggcctgcgt ctgtggcggg gccttcgtgg gcccgcgatg ccaggac ...

PCR问题的总结pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变 ...

这是本人关于分子生物学的一些基本技术方面的收藏,将陆续放上来,大家跟据自己情况取舍.如与以前有重复的,敬请谅解.PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Pri ...

PCR污染与对策PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因　　(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.　　(二)PCR试剂 ...

http://www.si.edu/archives/ihd/videocatalog/9577.htmSmithsonian Videohistory CollectionTHE HISTORY OF PCR(RU 9577)BackgroundThe Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, invented in 1985 by Kary B. Mullis, allowed scientists to make millions of copies of a scarce s ...