PCR技术

聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)　 聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年来发展起来的一种基因分析方法。　PCR-SSCP分析的基本程序为：首先PCR扩增特定靶序列，然后将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含变性剂的中性聚丙烯酰 ...

PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件，而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。关键词：PCR；引物设计中图分类号：Q524 文献标识码： 文章编 ...

一：25UL 体系的量如下：无RNA酶水 ？undefinedbuffer 5.0ULDNTP Mix 1.0ULEnzyme Mix 1.0ULprimer A ?(0.6M)Primer B ?(0.6M)RNA模板 ？（不大于1UL）Q (RNA酶抑制剂） 可加可不加二：虽说有几个试剂未知其量，但都是需要算的，给据要求，引物及RNA模板都可计算,具体如下：1. 引物量的计算：跟据引物说明书稀释引物，例如：primer A 1OD 48UL 意思实说：1OD （一般公司给合成的为每管1OD,量为100M）引物加4 ...

用的是反转录的CDNA为模板3‘RACE方法扩增一未知基因的全长利用已知序列设计上游引物 ，下游为试剂盒提供的Adaptor PRIMER扩增结果有杂带 但500bp左右目的条带很亮 纯化后测序结果是另一基因与我已知序列BLAST 2 SEQUENCE 并无相似性 ？？？？？到底是怎么回事啊？？？引物同源性在BLAST比对的结果怎么分析 看不大懂 都是100％一致的上游CGGTGAGAAGTTCCGTTATG3’Adaptor primer ctgatc ...

我要设计一个引物，扩增基因的CDS区全长，做蛋白表达，但是我比划来比划去都不行，两引物之间连续5个硷基互补，狂郁闷。各位大哥大姐，请不吝指教，救我于水深火热中。1 ccgcttagac aatgccccgg agccgccaga ccgtcgcgcc cctgccccat cgtagtatat61 gagctcgcct acacaaggac ccccgctaaa agccagagct cccagtcccc gaggcttgaa121 gacggggact cc ...

增加PCR特异性（一）引物设计细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点：1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错 ...

现有一段序列：CGGCTCTAAACTGTAAACCTCTAAGGGGTGTTATGGTATAACCCAGAGATTCTGCTAACTTTACATGTTCACTAAAGTATGTCCCCAGCCAAGTCCCAGTCGGATAGATCGTCTTCCCTTCATGTTTACATGGTAGGATAGGTGTTTGGAAATCTAGTGGACACTCAACTTTACACTCAACGTAACCGTAGAA ...

各位老师好，我是论坛新手，请多关照。本人在中华检验杂志写了一篇关于提高PCR阳性率方法的小文章。贴上，望大家指正、批评。提高乙型肝炎病毒P基因区聚合酶链反应检测阳性率的策略徐文胜 张瑞祺 缪晓辉 郝 勇 吴文雅目前许多抗乙型肝炎病毒药物是通过抑制HBV DNA多聚酶活性而达到抗病毒效果。然而病毒在药物选择压力下会发生基因突变，而获得对药物的抗性。测序是判断病毒碱基突变最直接和最可靠的方法，但在作序列分析之前必须采用聚合酶链反应（PC ...

lhailzhj主任在 2004-02-14 00:50已经整理了以往的内容：电泳问题这里主要是整理此日期以后的内容，不足之处还请lhailzhj主任和其他几位主任以及各位战友批评指正！如何回收电泳条带？DNA Marker准吗？sscp配胶的问题电泳用的MARKERS启用后如何保存关于PCR产物电泳的问题对溴乙锭用量的一点看法PCR结果目的条代弥散的原因EB有何危害有关小片段回收问题提RNA有较多的5s片段，问题出 ...

PCR优化在PCR的优化开始阶段，应用新的DNA模板，引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法，其扩增效果一般总不是最佳的。这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和（或）增加目的DNA产物的产率。表1列举了一些通常遇到的问题和对PCR反应进行优化的一些推荐方法。表1 PCR扩增的疑难解析问题 解释 补救措施目的产物条带在两种阳性对照管与试验管内部呈现明显的非常模糊的带型。目的产物条带有时呈不清晰的成片条带，条 ...

【产品研发背景】埃博拉病毒Ebola virus（EBOV），属于丝状病毒科丝状病毒属成员，是非分节段的单股负链RNA病毒。埃博拉病毒是一种高度危险的病原体，具有发病率快，致死率高的特点。目前已鉴定的埃博拉病毒有5 种亚型，分别是：EBOV-扎伊尔型（Ebola-Zaire，简称EBOV-Z），EBOV-苏丹型（Ebola-Sudan 简称EBOV-S），EBOV-本迪布焦型（Ebola-Bundibugyo，简称EBOV-B），EBOV- ...

原理：(1) PCR特点：扩增片段大小由2条引物与模板的结合位点决定；经过PCR扩增，产物以指数级数增加，达到目的片段的大量扩增。(2) Taq DNA聚合酶简化并推动了PCR的发展：水生栖热菌（Thermus aquaticus）,75OC温泉半衰期：95OC 38分钟最适温度：72OC，耐高温特性使PCR反应的特异性增加。(3) 各种来源的DNA都可以作为PCR扩增的模板DNAmRNA cDNAcDNA文库或DNA文库细胞直接煮沸(4) PCR的 ...

大家都知道,做MSP亚硫酸盐处理后,需进行纯化,我用的PROMEGE的DNA cleanup试剂盒,按它推荐的方法,每1ugDNA需纯化树脂1ml,而经过我查的文献和反复实验发现,1-2ugDNA用100ul树脂就够了,当然不再是按它的步骤,现将我的步骤公布如下,希望对大家有所帮助:1. Take 1 -2 ug of DNA and add double-distilled water to 50 mL in a 1.5-mL tube.2. Add 3.5 uL of 3 M NaOH (final concentr ...

PCR反应程序的优化1二价阳离子。在使用没有加Mg2+反应液时，应注意一定要外加一定浓度的镁离子。大量.二价镁离子与dNTP和模板〔磷酸二酯键骨架上的负电荷)结合，从而大大提高了反应的效率和特异性。2引物。PCR所需的引物终浓度一般为0.1~1.0µmol/L，使用更高浓度的引物将使所得的产物量急剧减少。如果新合成的引物在退火温度接近Tm值的情况下没有产物生成，就降低退火温度再进行反应;如果这样仍旧不能反应，则应马 ...

一、　　　原理　　硕盟TRIzol是一种快捷方便的总RNA提取试剂，可以从动物组织、各种微生物及细胞等中提取总RNA。在样品处理过程中，TRIzol可完全充分裂解样品，同时保持RNA的完整性。加入氯仿离心后，溶液形成上清层（水相）、中间层和有机相（下层）。取出上清层，可用异丙醇沉淀回收RNA；中间层用乙醇沉淀回收DNA；有机相可用异丙醇沉淀回收蛋白。　　　硕盟TRIzol试剂可用于少量样品的RNA提取，也可用于大量样品的RNA提取。提取R ...

Applied Biosystems公司关于Real Time PCR的介绍，比较简单，但希望对新接触这个领域的朋友会有所帮助。Page 1 of 8Essentials of Real Time PCRAbout Real-Time PCR AssaysReal-time Polymerase Chain Reaction (PCR) is the ability to monitor the progress of the PCR asit occurs ( i.e., in real time). Data is therefore collected ...

列位大虾：我是新手。准备扩增细菌基因的2100bp的基因序列，然后克隆、测序、E.coli表达，纯化，再做多克隆抗体。我用primer软件自己设计引物，总是有错配和二聚体，不知道该怎样设计引物？还有这么长的片段如果P出来后该选用哪一种质粒载体？根据什么选？测序用什么载体？基因序列：ATGACATTTGAAAAGCAAAAACACTTTAGTTTACGTAAACTAAAATTTGGTTTAGTTTCAGTTGCGA ...

更多详情请登陆：http://www.biogm.ebigchina.com技 术 转 让（1） 高效Taq酶菌株：该菌株所含质粒源于pTAQ，TAQ基因经过几次点突变，扩增效率更高。制备简单质量稳定，扩增片段能达到8Kb。提供制备工艺（粗酶制备和精酶制备工艺两套protocol，以及质粒信息）。同时提供相关文献。（2） 制备T-Vector 的菌株，该菌株所含质粒由pGEM-T easy 改造而成，经XcmI 酶切后形成T-vector（与pGEM-T easy ...

支持版主工作，友情整理6月15日至8月17日的无人应助帖（不规范帖出外）。年代有点久远的帖子，请您回复时同时PM给求助者:)引用yaplewang战友的一句话：七、八月是应助的淡季，，，因此无人应助帖比较多哦，请大家积极应助！【求助】速求引物序列外文文献作者：lotus115====================【求助】关于MSP（新手急求助!!)作者：pheonix_1314====================【求助】关于TAIL——PCR的问题作者：西在东 ...

标准的PCR反应体系：　　　10×扩增缓冲液 　 10ul　　　4种dNTP混合物 　 各200umol/L　　　引物 　　　　 　 各10～100pmol　　　　模板DNA 　　　 　 0.1～2ug　　 　 Taq DNA聚合酶 　 2.5u　　　　Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L　　　加双或三蒸水至 　 100ulPCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+　　引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物， ...