PCR技术

为克隆EGFP(模板为pEGFP-N2),我设计了一对引物:P1: 5' AGCTCAAGCTTCGAATTCTGCAGTC 3' 有酶切位点EcoR I.(GAATTC)P2: 5' CTCGGATCCTACAAATGTGGTATGG 3' 有酶切位点BamH I(GGATTC)用primer5.0 设计,rating 为79分,但两个引物都有Dimer,且P1 中Dimer的自由能高达-11.2,共有四条-10---- -11.2的Dimer.各位给看看吧,谢谢.这样的引物能扩增 ...

分子生物学软件　　目前，有很多软件可以解决分子生物学研究人员从立项到最后写论文的实际问题。但由于软件的数目太多，而且各个软件开发环境、运行平台和操作方法都各不相同——即使功能的某些方面是相似的，这就给使用者造成了许多的不便。赛百盛公司信息部在对相同作用的各类软件进行比较后，推荐一些最实用软件给从事生物研究的工作人员。　　 一、实验准备阶段 这时一般要查一些与实验相关的文献,以便对自己所要做的课题的最新的进展有一个基本的了解，从 ...

甲基化特异性 PCR(Methylmion Specific PCR，MSP)及其改进方法是检测基因甲基化的经典方法．MSP法的原理是首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为 尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不变。然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增，最后通过琼脂糖凝胶电泳分析，确定与引物互 补的DNA序列的甲基化状态。MSP法灵敏度较高，应用范围广。MSP 实验流程： 抽提基因 ...

RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b ...

Q1．无CT值（信号）出现A1．1.反应循环数不够。一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。2.检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。3.引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。4.引物或探针的设计，如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。5.模板量不 ...

今天到PCR技术讨论版逛逛，看到pgming2004的精华原创贴，下载附件后读了一遍佩服楼主善于总结的同时也想补充一点个人不同的看法。RNA 抽提（RNA Extraction）原文：三，抽提步骤1． 匀浆化作用取约100mg鼠脑组织放于玻璃研磨器内，先加0.2ml的Trizol溶液，研磨组织后，倒入1.5mlEP管中，再在研磨器内加入0.8ml的Trizol溶液洗，后全部再倒入EP管中。颠倒混匀10下，室温静置5分钟。2． 分离阶 ...

PCR技术：PCR片段拼接的SOE和SDL方法PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、 大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效 拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操 作繁杂，而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两种基因 拼接的新方法，即SOE和SDL法，就能巧妙地解决这个问题。SOE法　　1989年，H ...

引物设计软件 Primer 3标签: Primer 引物设计 2009-04-21 23:43实验室里做Q-PCR都使用这个软件，本来想整理一下如何使用，发现网上有了，就拷贝一下和大家共享。Primer 3 在线引物设计攻略（来自百奥知识网http://www.bioknow.cn/html/pages/747/paper_65747.htm）2008-10-20内容快照：开始之前：其实非常简单，不需要你下载任何软件，但是你得有一台电脑能上网。当然，最重要的 ...

PCR 的问题，无疑是绝大多数学生物的人都关心的问题。今天我们把相关内容整理出来，与大家共同讨论，希望对大家能有所帮助。。一、 引物设计所谓“工欲善其事，必先利其器”，这年头手工设计引物的人似乎不多，还是用软件方便些，防止你一不小心看走眼，丢一个碱基，同时计算起来也方便。设计软件有很多，既可以在线设计如Primer3.,http://frodo.wi.mit.edu/也可以用Primer5、Oligo6.0等等。到哪找？别着急，咱论坛 ...

检索途径　　在进行文献检索时，我们可根据文献的内部特征或外部特征进行检索。　　文献的内部特征是指文献所论及事物，所提出的问题，涉及的基本概仿即主题以及文 献内容所属的学科范围都是文献的内部特征；　　文献的外部特征包括题名，作者，作者单经以及某种特殊文献自身的特征标识。如专 种文献的专利另科技报告的报告号，标准文献的标准号等等。　　分类途经：从学科角度将文献内容划分到某一学科内，根据文献内容所属的类检索文 献的途经即为分类途经，检索工具设置的分类 ...

PCR-聚合酶链反应的进展北京大学第一医院　朱　平　　在聚合酶链反应(PCR)的方法建立以前，面院DNA长链上某种基因的变化有很大难度。1983年由Kry Mullis 等利用当时已经发现的DNA聚合酶，首先建立的体外DNA序列扩增法，基本方法是用寡核苷酸引物扩增位于两个已知序列之间的DNA序片段。反应在DNA聚合酶催化下完成。引物的序列分别与模板基因的序列互补，分别结合在模板DNA对应的两条单链的目的基因的两端随着引物序列从5’ ...

PCR引物银行是目前国际上最大的引物数据库，里面有超过18万种引物序列，它的引物序列能用于一般 的PCR，也能用于定量PCR，你只要输入基因针对的ID号（可以通过NCBI查询），这样就能得出引物序列。甚至你也可输入基因的名称，或蛋白质的名称，或者对应的Locallink都可以查到。目前引物主要针对人和小鼠的，今后将拓展到其它物种，如大鼠等。它的引物成功率达到99%，我想大家应该放心使用了吧。这个文章来源于一篇华人的文 ...

PCR技术简介　前言一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也是分子生物医学令人震撼的一例。何谓PCR简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内 (In V ...

在网上找的有关引物设计的材料.虽然自己没有这些软件,也不会用,但想推荐给能用得上的战友.引物设计的原则引物设计有3 条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。具体实现这3 条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（primer length），产物长度（product length），序列Tm 值(melting temperat ...

iCubate全自动多重微生物核酸检测系统-----扩增子拯救多重PCR技术(ARM-PCR)美国iCubate公司研究开发了革新的扩增子拯救多重PCR技术——arm-PCR，成功解决了多重微生物核酸检测中靶点不兼容的问题，并创新性设计了一次性全封闭卡盒，以及配套的卡盒处理仪、卡盒阅读仪和控制软件，整合形成现在的iCubate 全自动多重微生物核酸检测系统。同时，该系统还免费提供一个开放性的多重PCR检测试剂开发平台i ...

Book DescriptionIn the past decade, molecular biology has been transformed from the art of cloning a single gene to a statistical science measuring and calculating properties of entire genomes. New high-throughput methods have been developed for genome sequencing and studying the ce ...

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因　　(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.　　(二)PCR试剂的污染:主要是由 ...

结合网上查阅的一些信息和TaKaRa使用说明书中的引物设计要求，同时结合文献上的论述，总结出Real-time PCR 引物设计的要求及设计步骤。首先向那些以前发布信息的朋友表示感谢！因为有些是引用你们的（由于引用的比较散，无法署名感谢）1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区5’端的300-400bp区域内，可以用DNAman, Alignment 软件看看结果。2.引物长度一般在17-25碱基之间，上下游引 ...

Oncogene. 2006 Mar 13;25(11):1594-601.Using high-throughput SNP technologies to study cancer.Engle LJ, Simpson CL, Landers JE.Cetek Corporation, Marlborough, MA, USA.Identifying genes involved in the development of cancer is crucial to fully understanding cancer biology, for ...

自90年代Taqman探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）不断有新的技术出现，但是作为一种经典的定量PCR技术，Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选，这主要是因为相对于SYBR荧光染料，Taqman探针具有序列特异性，只结合到互补区，而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系，因此特异性强灵敏度高，而且条件优化容易；而相对于杂交探针，Taqman探针只要设计一条探针，因此探针设计较便宜方 ...