感受态细胞的制备及其转化

摘要： 美国佛罗里达大学科学家使用纳米粒子技术开发出一种新的大肠杆菌检测法即使样本里只有一个大肠杆菌也能检测出来整个过程只需要20分钟. 摘要: 美国佛罗里达大学科学家使用纳米粒子技术开发出一种新的大肠杆菌检测法即使样本里只 ...

摘要： 酵母高效转化的实验方法. 1、接种5ml液体YPAD或10ml SC30℃下振荡培养过夜.2、计数过夜培养物细胞密度以最终5×106个/ml的细胞密度接种50ml YPAD培养液.3、置30℃200r/min振荡培养至2×1 ...

摘要： 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子。 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子.基因水平的鉴定有酶切鉴定、 PCR 鉴定、核酸杂交和基因序列分析等.蛋白质水平鉴定有插入失活双抗生素对 ...

摘要： 为了满足广泛开展BrdU标记DNA检测对BrdU特异性单抗的需要我们制备了一株产生BrdU单抗的杂交瘤细胞株.本文对此细胞株制备过程及单抗鉴定情况作了简单叙述. ...

摘要： 探讨利用杂交瘤技术制备肿瘤疫苗的方法研究肺癌树突状融合细胞的生物学特征. 摘　要：目的　探讨利用杂交瘤技术制备肿瘤疫苗的方法研究肺癌树突状融合细胞的生物学特征.方法　　用PEG法将HGPRT缺陷型Lewis肺癌细胞株AL99 ...

一、材料与试剂 1. SOBor2xYT 2. MES 3. 足够80个管子的TFB（50 mL）/400转化DMSO 4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。 2. 加过夜培养的菌到5 ...

转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积 转化频率（转化子数/每ug质粒DNA）＝转化子总数/质粒DNA加入量（ug） 下面以大肠杆菌TG1电转感受态为例给你演示一下： 第一天，上午取大肠杆菌TG1菌液划线平板（一般要48小时以上才能长出单 ...

1. 从37℃培养16~20 h 的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52），或1 ml 新鲜的16~20 h过夜培养物，转到一个含有100ml LB培养基的1 L 或500 ml 培养瓶中。于37℃振摇培养约2~3 h（旋转摇床200~300 r/min），每隔20~30 min测量OD600值≈0.4。 2. 在无菌条件下将细菌转移到一个，用冰预冷 ...

一、感受态细胞的概念 重组DNA分子体外构建完成后，必须导入特定的宿主（受体）细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。在原核生物中，转化是一个较普遍的现象，在细胞间转化是否发生，一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系，另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系。 所谓的感受态，即指受体（或者宿主）最易接受外 ...

Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning 郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038 Institute of Orthopedic Oncology Fourth Military Medical Univer ...

进口高压灭菌器因其使用的安全性和自动化程序高，深受实验室用户的喜爱。那么，怎么才能买到称心如意的产品呢？怎样区分哪些产品是原装进口？哪些是国内组装产品呢？下面将告诉您如何选择进口高压灭菌器： 在选购进口高压灭菌器之前，首先需要了解，进口高压灭菌器，尤其是50升以上的进口高压灭菌器，在中国属于特种设备，在使用前，用户需要向当地的特种设备检查机构（或是锅检所，或是技术监督局，按各地的实 ...

酵母感受态细胞的制备 (1)从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 mlYPD液体培养基，30℃，250 rpm培养过夜； (2)测定过夜培养物的OD600值为3.0～5.0之间； (3)将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2～0.4； (4)在28～30℃摇床中继续培养3～6hr，使其OD600值达到0.6～1.0； (5)于室温1500g离心5 min ...

原理： 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。 应用： 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）。 一般流程： 1）细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密 ...

重组子可通过酶切进行鉴定，也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定，阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物。 1. 用牙签挑取平板上的菌落接种于 2ml 含适当抗生素的 LB 培养基中，37℃摇 床培养过夜。 2. 次日取菌液 0.2-0.5ml，13000rpm×3min 离心，弃上清，加入 20μl ddH2O 和 20μl 酚/ 氯仿，震荡混匀， ...

1．确定抗生素作用的最佳浓度： 不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性，因此在筛选前要做预试验，确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。 ①提前 24 小时在 96 孔板或 24 孔板中接种细胞 8 孔，接种量以第二天长成 25%单层为宜，置 CO2 孵箱中 37℃培养过夜。 ② 将培养液换成含抗生素的培养基， 抗生素浓度按梯度递增0（50 100 200 400 600 ...

1. 取 100μl 感受态细胞于冰浴上融化。 2. 加入 1μl 纯质粒或连接产物，轻轻吹打混匀，冰浴 30 min。 3. 将菌液放入 42℃水浴中热激 90 秒，立即放入冰浴中 2 min。 4. 加入 0.9ml SOC，于 37℃恒温摇床上 200rpm×1hr 温育。 5. 将菌液 4000rpm/min 离心 3min，留 200μ l 上清将菌体打散 ...

1. 挑取适当菌株的 E.coli 单菌落接种于 2mlSOB 培养液中，37℃摇床过夜。 2. 取 0.5-1ml 过夜培养的菌液 转种到 50ml SOB 中，18℃剧烈震荡，直到 A600达到 0.6。 3. 将培养物转移到 50ml 离心管中，4℃ 4000rpm/min离心 10min。同时在冰浴 上配置 TB 溶液。 4. 弃上清，将离心管倒置于滤纸上，使培养液被吸干。 5. 取 1 ...

磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至关重要。在实验中使用的每种试剂都必须小心校准，保证质量，因为甚至偏离最优条件十分之一个pH都会导致磷酸钙转染的失败。

转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。

一、对于感受态细菌效率的测定或连接产物的转化(其它如基因突变产物的转化等参考连接产物进行)： 1. 在冰上缓慢融解感受态细菌(对于新鲜制备的感受态就可以直接使用了)，如果检测感受态细菌的效率，加入100pg-10ng质粒，但质粒的体积不宜超过感受态细菌量的10%。如果转化连接产物，每100微升感受态细菌加入10微升连接产物。 2. 轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒或连接产物。冰浴或冰水浴放 ...