DNA实验技术

2425611 刚刚开始做实验 请教一个关于质粒比较基础的问题，质粒转染细胞后，是同细胞内的基因相融合后表达还是仍以质粒的环形形式存在表达？每个转染细胞内转染进入的质粒数量是怎么样的啊？这个数量和蛋白表达多少有没有关系？还有个问题是请问现在最常用的质粒转染技术是什么？菜鸟级的问题，请大家积极帮忙，多谢！！wanadoo 两种转染。 酶切，基因相融合。非酶切，环形形式存在表达。我用lipofedaminwoxingwosu 2425 ...

borderland 搞临床的，不看基础很多年。书上说，微卫星DNA重复次数10-60，为啥么属于高度重复序列，高度重复序列不是重复次数达数百万次么？应该是中度重复序列才对。请专家拍砖borderland ?????borderland ????georgeli 晕:)freecell 参考此文： http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_shxmsytx200404001.aspx本文由丁香园论坛提供，想了解更 ...

flster 如果知道某染色体的某一区域，如何知道改区域及附近编码了那些基因。如：X染色体上起始位置为72928764，终止区为 72965791的一段DNA都编码哪些基因该如何查？woxingwosu NCBI上有查基因组序列的呀，自己学习吧yake211 在 ucsc 网上查找，不过你先要搞清楚你的数据版本是 hg18 还是 hg19, 不同的版本物理位置有一定的变化。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

happy_m_lucky 想通过直接测序的方法检测一个基因的SNP，只检测外显子、5'UTR、3'UTR区，共三十多个已知位点，对照组和病例组共394个样本，不知道样本量够不够，查了很多资料也没找到，想请教一下怎样确定样本含量，能麻烦大家帮我解答一下吗？非常感谢！yyyantopbt 可参考一下帖子：如何计算作SNP需要的病例数：http://genetics.dxy.cn/bbs/topic/8096982SNP与病例数：ht ...

ono1180 求助各位同道：我想过表达一个基因，想选用一个质粒载体连接此基因再转染入细胞，选用的载体需要有绿色荧光标记，而且能筛选出稳定转染的细胞系，上网查了一下觉得pEGFP系列的好像符合我的要求。请问这个载体怎么样，大家还有什么载体觉得挺好，请指教，感谢了。xiaokangkuaile 我用的是pEGFP-C1表达载体，但我的目的基因对GFP表达有影响，转染效果很差xiaokangkuaile 现在正在做其他的目的 ...

real_madrid_146 有个选择性剪接的问题不是很懂，想请教下大家一个完整的mRNA个外显子，起始密码子在第一个外显子，终止密码子在第十一个外显子。第二个外显子选择性剪切缺失之后，随后的序列发生移码，终止密码子出现在第三个外显子了，那后面4-11个外显子还能翻译不？有没有可能后面的外显子内重新出现个起始密码子，也同样翻译？类似于原核生物的多顺反子那样。因为在genebank上可以查询到相应的序列，里面标注的 ...

zaiju512 请问有没有人知道哪能买到所有TLRs敲除的小鼠或大鼠？zaiju512 想法有点天真呵呵hzyyy zaiju512 wrote:想法有点天真呵呵文献上有报道的！C3H/Hej小鼠，去上海斯莱克问一下吧！hzyyy 补充一下，C3H/Hej小鼠是TLR4抑制的小鼠，但所有TLR敲除的没法搞，因为老鼠几乎不会活，所以从这个角度讲，2楼的兄台还是有一定道理的！洄游的鱼 大鼠基因敲除研究才刚刚开始，肯定是没有的。前面几位说 ...

huahualian7 急急急问：DNA复制时连接冈崎片断的酶是聚合酶还是连接酶？谢谢啊！zhujoker 聚合酶yuxiongying DNA聚合酶1填补冈崎片段引物切除后的空隙，然后连接酶连接两个相邻的冈崎片段本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

吴佰霖 我的基因过表达，结合文献，推理应该是IKb alpha下降，而NFKB升高 （IKb可磷酸化NFKB，使后者降低）但现在我的结果是两者同时升高，请问可能的原因有哪些呢？谢谢woxingwosu 可否检测一下NFKB的磷酸化情况？erik NFKB是检测核内的吗？检测p65还是p50/吴佰霖 检测总蛋白，为P65本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

cdduanshui 收缩环：在有丝分裂后期中轴附近形成的激动蛋白质纤维环，负责将子代细胞分开。我也看来一些关于胞质分裂和F-actin的一些文献，但由初涉这一方面，有些英文也看得不是很明白，心里有个疑问请教各位老师;由actin形成的收缩环是不是有一面附着于细胞膜上，另一面连着myosin，然后由myosin提供动力把胞膜往里拉?麻烦老师解答下，谢谢cdduanshui 顶一下，希望老师们帮助woxingwosu Co ...

suleipang 本人是研一的学生，还没有进过实验室。如果发现某肿瘤组织中某基因突变，那么使用什么样的方法能够证明某基因突变与肿瘤发生是否相关？希望前辈们不吝赐教，谢谢wales127 要知道你这个基因是否有过报道和肿瘤发生相关？ 如果是与肿瘤发生相关1，简单的就是检测下该基因下游的蛋白表达是否异常，这些下游蛋白如果有变化，需要在细胞水平证明其特异性2，再稍微复杂点的话，构建一个突变的转基因载体，利用组织特异性prom ...

brucewu1986 我挑的阳性克隆（已检测），在加有抗生素的摇瓶中培养后，放在4度冰箱一天，枪头蘸取少量，6ml加相应抗生素管摇过夜，菌液浑浊，kit小提，测浓度约150ng/ul,但电泳检测看不到条带，酶切电泳也看不到，会不会是质粒丢失？但为啥可以在抗生素的培养基中生长？目的片段2.5kb，载体6k各位战友有没有遇到这种情况woxingwosu 我觉得一般情况下，质粒丢失的几率比较低。你是怎么检测阳性克隆的呢？如果是菌 ...

riset 看了一些文献，常用的荧光素酶质粒是pGL3，但是这个质粒图谱上，荧光素酶下游只有一个XbaI的酶切位点，不是多克隆位点，请问是如何解决克隆片段顺序问题的。谢谢。shilei5794749 用你序列的特异上游引物和RVprimer4，正向连进去菌P能扩出条带；反向连进去的扩不出条带。riset 多谢指教，另外再问下，UTR一般都比较长，不能全部克隆,一般克隆多长合适呢？还有就是PCR扩增UTR的时候是以基因组为模 ...

jiajiawonder 综述要用到这个 外显子剪接沉默子 可是不知道怎么能用简单明了的词解释清楚，求助高手~多谢~shilei5794749 Exonic splicing enhancer (ESE)An exonic splicing enhancer (ESE) is a DNA sequence motif consisting of 6 bases within an exon that directs, or enhances, accurate splicing of hetero-nuclear RNA (hnRNA) ...

cdduanshui 请问各位老师：RhoGEF和RhoA有没有什么关系的？RhoGEF到底是个什么东西，也是小G蛋白的一种吗？只知道它叫RHO型鸟嘌呤核苷酸交换因子，刚刚接触这方面的东西，请老师点拨一下，不胜感激。cdduanshui 求教求教！cdduanshui 在顶一下，老师帮帮忙woxingwosu http://www.scitopics.com/Rho_GEFs.html本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的 ...

yixhchen 发现一个基因在某肿瘤细胞系中表达下调，下一步若做机制研究，可用哪些方法？新手，请各位高手多指点！yixhchen 没有人帮忙吗？提供一个方向就行了，不需太具体。woxingwosu 我来说说看：首先，确认是蛋白质水平的下调还是mRNA水平的下调，可以通过western blot和real time RT-PCR来初步确认一下。如果是mRNA水平上就出现下调，那么比较有可能的是这个基因是受这个癌肿瘤的某个信号通路或者是 ...

hbglmn 本人进行某个基因启动子的DNA测序，发现一个突变点，但是不知道怎么查是否已经有人发现，恳请各位高手帮忙！非常感谢，因为本人刚从临床过来开始试验，很多东西不明白，请能够详细点说明！woxingwosu 呵呵，那你只能是看paper了，没有其他办法。不过基因的启动子突变研究，除非发现了这个突变真的具有很强的调节蛋白表达的效果，不然我觉得没有必要做下去的。默默默默默 同意楼上的建议！hbglmn 谢谢各位，我问了我们实验 ...

1179380155 请问能用ELISA（酶连接免疫吸附）法检测基因突变吗？感激不尽！woxingwosu ELISA-based Ki-ras gene mutation analyses in pancreatic and cholangiocarcinoma cells and tissues.AbstractDetection of Ki-ras mutations is one possible modality for diagnosis of human neoplasms, particul ...

youyoubantang 想请教各位大侠，等位基因特异性表达分析：allele specific expression (ASE) assay 到底是什么，他的原理及操作步骤是怎样的，特别是原理，一直搞不明白还有就是他怎样验证cis-eQTL 的真实性shilei5794749 DOI 10.1016/j.cell.2010.09.049 看这篇文章！讲 long-noncoding RNAs 中 Jpx 调节 x chromosome inactivation 的。里面有 allele sp ...

har1224 我在genebank提交核苷酸序列遇到困难，请求园内老师帮助，自己花费很大精力，可是还是存在问题。 Do you know the correct annotation for your sequence(s)? If so,please resubmit your sequence(s) with relevant features such as:- coding regions (CDS features) including nucleotide spansand reading frame. Using t ...