DNA实验技术

第四节 病毒载体携带的siRNA介绍在大多数真核细胞，RNAi是一个高度保守的机制，它被认为是基因表达和抗病毒机制的调节剂。1-4 RNAi是一个多级的过程，第一步是:在一种核糖核酸酶Ⅲ样的酶(Dicer5 )的作用下，双链RNA(dsRNA)被裂解成小干扰RNA(siRNA)。6这些21到23个核苷酸的siRNA随后参与构成RNA诱导的沉默复合物(RISC)，可以将siRNA带到同源mRNA的地方，并将其破坏。在2001年，E ...

外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的ＤＮＡ连接酶催化，这两 ...

中文名: 基因X原名: Lewin's Genes X别名: 基因10,Genes X作者: Jocelyn E.KrebsElliott S.GoldsteinStephen T.Kilpatrick图书分类: 科技资源格式: PDF版本: 英文版,扫描版出版社: 高等教育出版社书号: 9787040269611发行时间: 2010年01月01日地区: 大陆语言: 英文打包下载： https://skydrive.live.com/redir?resid=2653E459C864C539!1286 ...

请教平端连接http://www.dxy.cn/bbs/thread/1172641急问!平端连接http://www.dxy.cn/bbs/thread/953770平端连接问题http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/395276_1.html请教平端连接高手（讨论专贴）http://www.dxy.cn/bbs/thread/2213062平端连接的怪现象?http://www.dxy.cn/ ...

DNA分子标记、基因组作图及其在植物遗传育种上的应用(2)发布日期：2003-2-16 22:17:00 作者： 出处：中国农网b　SPARs(Single Primer Amplication Reactions)标记　通过采用基于微卫星或简单重复序列(SSR)的单一引物来扩增SSR之间的DNA序列(Gupta等，1994)。在二碱基，三碱基，四碱基和五碱基的简单重复顺序中，以四碱基的简单重复顺序最为有效。这些标记大多数散布于DNA序列中，它们多为 ...

CGH（比较基因组杂交）: CGH用不同的荧光染料分别标记肿瘤基因组DNA（如spectrum-green-dUTP）和正常基因组DNA（如spectrum-red-dUTP），再以相同比例与正常人中期染色体杂交，然后测定沿染色体长轴的两种荧光信号的相对强度比值，通过肿瘤和对照DNA间荧光信号比值的差别找出肿瘤标本中异常DNA区域。正常染色体的绿红比率变化一般在0.85-1.15之间，超过此范围就是异常，若增加的倍数超过 ...

在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中,都需要使用寡核苷酸作为探针或引物,而对这些反应的质量起最重要影响作用的,就是这些寡核苷酸探针或引物。用优化的寡核苷酸进行实验能够很快得到好的结果,而用不够合适的寡核苷酸时,常常得出似是而非的结果,不仅大大增加了后续实验的工作量,还可能一无所获。怎样优化设计寡核苷酸呢?至少有下列几个方面的问题需要考虑。1. 估测可能形成的DNA或RNA双链的稳定性 寡核 ...

这是在网上看到的，觉得还行，大家看一下1、载体和插入片段DNA的量都要比黏末端连接时的用量多，可以增加到5倍以上。2、载体务必去磷酸化处理(许多公司都有这类酶，比如NEB的CIP(点击进入产品页面)。3、如果是PCR生成插入片段，要用产生平端片段的PCR酶(如PFU)，必须磷酸化5'末端，可以磷酸化引物，也可以磷酸化产物，我一般磷酸化产物，这一步最关键也最容易遗漏(请参考T4PNK(点击进入产品介绍)。普通Taq酶PCR ...

GENE THERAPY: Twenty-First Century MedicineInder M. Verma and Matthew D.WeitzmanLaboratory of Genetics, The Salk Institute, La Jolla, California 92037;email: verma@salk.edu, weitzman@salk.eduKey Words viral vectors, retrovirus/lentivirus, adenovirus, AAV, clinical ...

加分作为鼓励，因为有的问题还需要继续讨论！谢谢！第一次做双酶切连接有90％连接成功率（挑了24个克隆），重复性也不错。兴奋之余，相与丁香园各位战友一起分享经验，因为以前得到了许多帮助。准备：目的片段PCR产物胶回收，用乙醇沉淀法纯化胶回收产物，并经紫外分光光度计计算其浓度（A）质粒同样经乙醇沉淀法纯化，测定纯化产物的浓度（B）酶切：目的片断和质粒分别进行双酶切，大约10单位酶能完全切断1μg左右的DNA片断(A/B) 1 μg酶1 ...

DNA定量方法　核酸提取（包括DNA和RNA)---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------DNA定量方法http://www.bioon.com/bbs/post/view?bid=67&id=545030&sty=1&tpg=6&age=0http://www.bioon.com/bbs/post/view?bid ...

一、基因芯片：1、基因芯片综合分析软件。ArrayVision 7.0一种功能强大的商业版基因芯片分析软件，不仅可以进行图像分析，还可以进行数据处理，方便protocol的管理功能强大，商业版正式版：6900美元。Arraypro 4.0Media Cybernetics公司的产品，该公司的gelpro, magepro一直以精确成为同类产品中的佼佼者，相信arraypro也不会差。phoretix™ Array Nonlinear Dyn ...

电转化 请教电转化 求助！电转化！！！！！！ 求助！电转化！！！！ 电转化！求助！ ［求助］关于电转化 关于电转化 请教 电转化TG1菌转化效率 急！ 球面对称设计在大肠杆菌JM109电穿孔转化优化试验中的应用 提取的质粒进行电转化的过程中怎样防止污染？？ 电转化,谁来帮我一下,现焦头烂额 求助：电转化仪器使用和实验步骤 枯草芽孢杆菌的电转化没有转化子，请指教！ 请问大肠杆菌能否用电转仪转化载体 SOS！电击转化老是失败！ 请问有没有师兄师姐做过电转化化学转化 请教：关于连接转化 关于连接转化的问题 ...

骨髓细胞染色体标本的制备一、原理骨髓染色体标本制备通常用于白血病患者，特别是慢性或急性粒细胞性白血病，因为骨髓反映粒系统细胞增生情况，这些病人不宜用外周血。即使是淋巴细胞性白血病，也不主张用外周血，因为加PHA刺激外周血培养，只能获得正常淋巴细胞分裂相，并不能反映那些病理淋巴细胞的染色体改变。骨髓细胞属不断增殖的细胞，培养可分短期培养和直接制片法，无论哪种其培养液中均不需加PHA。二、用品和试剂同外周血染色体制 ...

这段时间在作实验,这篇文章我觉得特别好,现在拿出来和大家分享一下!从质粒抽提谈起碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。每个曾经用碱法抽提过质粒朋友，希望你看本文后能有所收获。 为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。 让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先 ...

使用Clontech公司的In-Fusion PCR Cloning Kit快两年了，在此谈谈心得。早期的In-Fusion PCR Cloning Kit是干粉，现在已经发展成为试剂盒，两种我都用过。相关原理和具体操作步骤可以下载公司网站的说明书http://www.clontech.com/images/pt/PT4065-1.pdf。此方法最大的优点就是不用考虑插入片段的正反性，只要链接成功就是阳性克隆。但是有时候链接效率低，比较不容 ...

Humana press是全球最知名的生物期刊和书籍出版商之一，现已成为springer出版集团的成员。Methods in molecular biology和Methods in molecular medicine系列是Humana press出版的最经典的书籍。Methods in molecular biology主要内容为各种实验指南，内容新颖全面。下载连接：Vol 1 Proteinshttp://rapidshare.com/files/378 ...

一、 GFP背景概述绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）最早由Osamu Shimomura于1962年在水母（Aequorea victoria）（图2a）中发现。这种蛋白质在蓝色波长范围的光照激发下发出绿色荧光，其发光过程需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，而且，这个冷光蛋白质可与钙离子（Ca2+）相互作用（图3）。在Aequorea victoria中发现的野生型绿色荧光蛋白的分子量较小，仅为27 ...

这段时间做斑点杂交,因为每次做都拿着英文的翻实在太麻烦,也容易出错.为了实验方便将DIG标记检测试剂盒的说明书翻译了一份,与大家共享,如有错误,敬请指正!DNA-DIG标记：1、每个标记反应中加入10ng-3ug DNA，另加ddH2O补充至15ul体积。（未标记的对照DNA加5ul，10ul ddH2O）2、将装有反应物的离心管放入沸水中变性10min，然后迅速冷却；3、然后依次加入以下溶液：Hexanucleotide Mix, ...

我以前做的实验都是通过感受态的转化方法来转化枯草芽孢杆菌的。但是枯草芽孢杆菌的感受态转化效率比较低。最近我采用电转化的方法，但是遇到了一个问题：就是每次电击完毕后，加入复苏缓冲液37度复苏2h后，发现原来还混混的转化液竟然变得澄清了！涂布后一个转化子都没有！不知道是怎么回事？还有：垂悬菌体必须要温柔吗？我挺用力的，但不至于一个转化子都没有吧？质粒样品里面的RNA很多有没有影响啊？我的质粒RNA蛮多的。质粒加多了 ...