DNA实验技术

为特别鼓励，加两分！并继续跟踪！----mybbff近日打了一个关于核酸抽提的基础现状的草稿；没有去找参考书润色，所以会有点凌乱。首先声明的是：这篇东西只为有一定核酸抽提基础知识的人准备，同时也将会及时修改 (我突然发现了 edit 的功能)。那些分子生物学的过客，最好不要看本文；一是我的思维有点跳跃，二则是没有必要糟蹋自己的时间。写这篇东西的另外一个原因是，我一直在思考如何简化经典的无介质的核酸抽提程序。最经典的是裂解一步，去 ...

（前面的几个帖子太长了，看一遍所花时间长到逆历史潮流，只能新开一帖，希望快餐一点。本帖不回答求助，先致歉。）1：苯酚保存条件的实验苯酚的保存条件，正统的说法：避光、4C、上覆一层液体、密闭，可保存 1 个月。下面是我的一个实验：3 月 10 日，取 Tris 饱和苯酚 (加入 beta-Mercaptoethanol 抗氧化) 到 6 个透明 1.5ml 离心管中，其中 3 管再覆盖少量液体。取一管未加液体的和一管加液体的放入 4C 冰箱，其余 4 管置于室温。室温的 4 管有两管 (加液和不加液各一管) 用刀子将离心 ...

欢迎大家光临腺病毒之家！希望在这里可以找到你想要的东西！最近，着手将本帖的目录整理了一下，这样便于大家快速找到自己需要的东西！为了促进核酸版的发展和满足广大战友的需求，还请战友们多多提出宝贵的建议！Page 1：1. 电转化感受态的制备2. 穿梭载体Pme I 线性化及回收3. 重组腺病毒质粒的判定4. 化学转化法同源重组Page 2：1. 同源重组的形式2. 阳性重组质粒的判定3. 重组腺病毒的包装（质粒纯化、线性化、转染）Page 3：1. 阳性重组质粒的判定2. 长片 ...

最近有不少战友在做ChIP实验，希望我的一点经验对大家有帮助（本贴不谈实验步骤，最后我会附件一份说明书，有详细步骤，另外建议像我一样的新手用试剂盒，避免不必要的麻烦）一、原理转录从基因的启动子区开始，由一系列的转录因子结合到基因的启动子区，通用转录因子结合在基本启动子区起始转录，而这个过程对基因的转录是必需的，但不是充分的，通常需要一些特异的转录因子结合在上游调节序列，使基因特异表达并维持的合适水平，ChIP主 ...

如何选择酶切缓冲液，如何提高酶切效率，尤其是PCR产物的酶切、双酶切、特殊酶切，总结了以下几点，希望对大家有帮助，欢迎补充！1.PCR产物的酶切。PCR产物的酶切与引物上引入的保护碱基有很大的关系，所以设计引物的时候就应该注意到这一点，如何选择保护碱基，具体参见NEB网站上关于保护碱基的资料:PCR产物的酶切相关的帖子：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/242899_1. ...

第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定第一节 概 述　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达 ...

克隆心经——一套帮助新手快速作出克隆的Protocol本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接）简介：将用作载体的质粒A（制作大片断）酶切3μL ，要切出小片断的质粒B酶切7μL ...

最近看到很多战友在论坛上询问如何查询基因序列、如何进行引物设计、如何使用BLAST进行序列比对……，这些问题在NCBI上都可以方便的找到答案。现在我就结合我自己使用NCBI的一些经历（经验）跟大家交流一下BCBI的使用。希望大家都能发表自己的使用心得，让我们共同进步！我分以下几个部分说一下NCBI的使用：Part one： 如何查找基因序列、mRNA、Promoter （第一页）Part two ：如何查找连续的mRNA、cDNA、蛋 ...

自己的实验刚刚开始，又涉及到质粒的提取。翻译了OMEGA 的大/小规模质粒提取试剂盒的说明书（D6922-01和D6942-01）。希望能给和我一样的新手一点帮助，同时请大家指正多给建议，特别是自己的心得啊。全是自己打的，帮顶让大家都能下啊:)E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液 ...

近期发现连接转化的问题特别多,希望各位战友能把自己的问题和意见解答都交流出来,只要有建设性的不管问题还是解答,打分从宽,以促进各位战友共同进步,不至于在这些常规问题上浪费时间和精力.同时也希望发问的战友尽量在后面跟帖而不是另开帖,也希望各位战友能把自己以前的有建设性的问题及解答粘贴过来,互相交流.近期的链接如下(1.10-1.5.可以直接在链接下面讨论):【求助】急救!关于重组质粒构建的问题.http://www.dxy ...

SNP（single nucleotide polymorphism），单核苷酸多态性。指在基因组的DNA链上，由于单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP数量很多，既可能发生在编码序列上，也可能发生在非编码序列上。发生在编码序列内的SNP，既有不改变氨基酸的同义突变，也有改变了氨基酸的非同义突变。那种改变了氨基酸的非同义SNP就改变了生物性状。由于SNP能稳定的遗传下去，所以在同一个群体当中，那些具有相同SN ...

“表观遗传学现在成为了肿瘤研究中的热点问题。我们现在已经很清楚肿瘤的形成都伴随着DNA甲基化和组蛋白的修饰异常。全基因组的低甲基化（hypomethylation），抑癌基因启动子CpG岛高度甲基化(hypermethylation)，众多关键基因的组蛋白密码被改变，以及组蛋白H4去已酰化和三甲基化，这些都是肿瘤细胞异常表观遗传谱的明显特征。、、、，我们有必要建立一个雄心勃勃的计划去认识肿瘤发生中DNA 甲基化和组 ...

动物体内转染，简单地说，就是用RNA和DNA直接打动物完成干扰和表达。再通俗地说，用合成的(RNA)或者提取的核酸(DNA)，就可以完成以前的动物转基因或者基因敲除的实验，无需再用病毒或者基因敲除动物。实验周期可以缩短为几天，花费几千元即可进行实验。动物体内转染技术的出现，让广大生物医学研究者，轻松进行动物的基因干扰、导入等操作。尤其是临床医学工作者，可以在很少工作量较少经费的情况下，直接针对研究的疾病进行动物实验， ...

本书有29章，全是英文，经翻译成中文，首次在此公开，就是说还未出过正式的中文版，请珍惜。 现将第1章放上，因内容太多，打成文本将超过千页，将会陆续放上，当然，首先是大家都喜欢！第1章 基因就是DNA早在一个世纪以前，孟德尔(Mendel)定义了基因的基本属性。在他的两个定律中将基因归纳为一种“特殊因子”。在它从亲代传给子代的过程中是不改变的。同一个基因可能以不同的形式存在（突变）。在二倍体的植物中，含有两个染色体组。每个子代从两个母代中各遗传到一组染色体。这同基因的行为相同。相当于发现染色体是基因的载体。下一步是证明每条染色体是由线性排列的基因组成。孟德尔定律预测不同染色体上的基因将各自独立分开。然而在同一染色体上的基因表现为连锁遗传。基础观察显示不同染色体上的基因是以随机重组的方式代代相传，然而连锁性基因重组的几率下降，就是说它们有在一起不分离的趋势。通过基因分析可以绘制出基因连锁图的结构，包含了1条染色体上携带的所有基因。连锁群的基因图与自然存在的染色体相一致。在二十世纪前五十年建立高等生物的遗传图。基因被组合成像一个带子上的珠子。它们出现在固定的位置上，基因的重组包括同

凝胶迁移或电泳迁移率检测（Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA）是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术，最初用于研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用，可用于定性和定量分析。这一技术目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。加分原则：1. 你可以在此跟帖提问。如果你的问题有一定深度，引发战友们积极讨论和思考。加1-2分。2. 回答问题或介绍经验。可加1-2分。 ...

一个高人的实验注意事项——超级有用记不得是在哪里看得了对我的用处相当的大，拿出来同大家分享：实验中的每个环节都很重要忽略任何一个都可能导致实验的失败每个人在实验中都有自己的一些好的细小的习惯例如tip头吸完后马上从移液器上取下来以免忙乱的时候又以同一tip汲取另一种试剂用完量桶或者烧杯后，及时清洗，并放入烘箱。不管大小实验，做完后都要认真做记录。一个枪头如果可以连续吸两次的话，也不能吸，主要是第二次吸时不准， ...

最近做大抽，用的是Qiagen Maxi kit, 一开始抽提产量少，因为是公认的昂贵而好用的试剂盒，觉得是自己操作的不好。就仔细研究了说明书，及整个提取过程，得出一些经验。（high copy plasmid）1.摇菌：菌摇得好不好十分重要。整个过程，其他步骤完全按试剂盒说明操作，一般没有问题，唯独摇菌得自己操作。a.个人觉得还是先活化摇菌8h，在稀释后扩大培养较好，不要偷懒。b.摇菌量问题：试剂盒有推荐cultrue volume，我的推荐 ...

写在前面的话：近一段时间由于参与了院子里的管理，接触到了更多的帖子，感触良多。大家好象都习惯于发帖提问，而很少去浏览一下以前的帖子，但然也有一些资源太多了，寻找起来太麻烦。不过看到一些帖子在那里挂了几天没人应也不愿搜搜的就实在无法理解了。就象才进院子里的新手很关心自己下载资源的权限，只要一看到什么资源就下，至于有没有看那就是另一回事了。鉴于此，我们决定开一个热门问题的专帖来讨论这个问题集中以下并并把它作为静态 ...

说明：资料占有数和资料利用率成反比，是我们大多数人的一个坏习惯（包括偶自己）。近期论坛不少帖子都对实验室里的所用水感到困惑。我自己最大的一个体会是层析试验中缓冲液的配制，所用的水对离子交换层析和疏水层析的效果有所影响。为此， 特地摘抄一段大家都知道（但未仔细学习）的内容，以共同来温习实验室用水的相关常识。问题：实验室中常见规格的水及使用注意点?1、自来水（Tap water）Tap water is usually of uncontroll ...

看文献想到的。希望大家从实际出发，讨论不同方法的优缺点，注意的是这里的突变是广义的包括染色体的改变。建议讨论从如下方面展开：1、技术名字、基本原理2、具体实现方法/手段3、应用4、优缺点5、相关技术发展概况6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评7、其他本版前期的明星技术：1. 【交流】核酸版2005年9月份明星技术: ribosome display2. 【交流】核酸版2005年8月份明星 ...