DNA实验技术

一、《Molecular Cloning 3》英文版，主要介绍分子克隆的基本实验技术操作，新手如果看不明白此版，可以自己买一本军科院翻译的中文版。Table of ContentsChapter 1: Plasmids and Their Usefulness in Molecular CloningChapter 2: Bacteriophage and Its VectorsChapter 3: Working with Bacteriophage M13 VectorsChapter 4: Work ...

打算先尝试大家都赞的原核表达系统（操作简单才是上策，反正偶不打算把残存的青春继续贡献在充满毒物的环境中了），以及目前广泛应用的大名鼎鼎的Novogen公司的pET系列。经历了一次低级错误后，在实验时最可以信赖的范博士的帮助下，终于将引物定稿。感谢英骏公司总部在进行机器调试，才让我有机会改正两天前的错误，虽然不是我毕业用的实验。入正题。设计表达载体用的引物与克隆基因用的引物是两种完全不同的思路，后者需要考虑很多 ...

中文名称：基因八英文名称：GENES VIII发行时间：2004年地区：美国语言：英语共64.1 MB下载地址：http://www.biosunny.com/xiabiaoxiangxi4.asp?ID=12简介：本书适用于分子生物学、分子遗传学及相关课程，是从事生物遗传学、生物化学、细胞生物学、基础医学等专业人员进行科学研究的重要参考书。20年前Benjamin Lewin 的Genes一书从根本上改变了当时分子生物学和分子遗传学 ...

目的将复杂的细胞分子混合物加入有机溶媒，除去蛋白质及其它成分，就可以纯化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白质变性(denaturaion)的特性来进行萃取的步骤，DNA和RNA不溶于有机溶媒中，而溶于水层。另外，分子选殖(molecular cloning)常利用洋菜胶(agarose)来分离不同大小的DNA片段或用以纯化DNA。DNA经限制酶反应、自胶体中溶离或任何酵素反应后，常常 ...

核磁共振技术在结构生物学研究中的应用颜贤忠(国家生物医学分析中心)1. 前言人类基因组计划提供了大量新的信息，并由此改变了生物学研究的方式。这些信息特别在结构生物学领域产生巨大影响，导致了一个新的研究领域的产生，这就是结构基因组学，或者叫做基于结构的功能基因组学。基因组学的主要问题之一在于它不能确定新的基因产物的生物学功能，而这正是功能基因组学要解决的问题。利用新的基因与已知功能基因之间的序列同源性比较，人们在发 ...

目的：1、方便地提供文件的上传下载，减轻dxy服务器的承荷。2、为战友们提供资料交流的平台，尤其是低分战友。使用说明1、邮箱名称：ng_dxy@163.com(停止上传)；新邮箱：xuxh008@gmail.com备用邮箱：hesuanjishu@yahoo.com.cn注：请上传资料到新邮箱时同时上传一备份到备用邮箱2、欲提供共享的资料不超过30M。上传到邮箱前请先提出申请。格式 如下：资料名称-资料内容-资料大小-资料来源-（实 ...

提供给新手，希望对各位战友有帮助，多多参与核酸技术版的讨论！引物篇1.引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链 ...

酶切基础知识酶切DNA酶切一般分为质粒直接酶切和PCR产物酶切。DNA酶切及凝胶电泳一.DNA的限制性内切酶酶切分析　　限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从 ...

在美国，有一个叫“冷泉港”的地方，那里被誉为生命科学的圣地，是分子生物学者们神往之处。1982年，一部叫《分子克隆实验指南》的书在冷泉港实验室出版社诞生，它的前身是1980年冷泉港真核基因分子克隆讲习班实验方案的汇编。7年后，该书又出了第二版。当时的人们也许未曾料到，这部著作在20年的时间里竟成为指导生命科学前沿科研工作的一部“圣经”。　　然而，生命科学的发展突飞猛进，研究技术也是日新月异，昔日的经典似乎已经不能再继续满足 ...

我做不出来克隆的时间长达半年，期间克隆实验方面许多问题都遇到过，现在总结主要的一些问题和大家交流，希望大家以后不要犯我一样的错，少走弯路。1、感受态细菌本身有质粒污染，这个问题困扰了我三个月，一直到最近才找到原因，我这里犯了最大的错是没有做过感受态检测。也许大家奇怪为什么在三个月内的时间里没有怀疑到感受态，不用奇怪，因为感受态“表现的太正常了”，每次涂板都长菌斑，每板20-30左右，很正常；我一个同学用这样的感受态 ...

最近由于实验需要, 需要查阅载体图谱, 到园子里搜罗一番, 发现虽然有人问载体图谱阅读的问题, 也有前辈回答, 但都不详细, 借自己也在琢磨这个问题的机会, 将我学到的东西整理一下, 于大家分享, 也算我对 DXY 的一点小小贡献!载体主要有病毒和非病毒两大类, 其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素1、复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。2、抗生素抗性基因 可以便于加 ...

前段时间在丁香园上查找关于启动子分析的文章，帖子很多，但感觉介绍得都不够详细，而且时间比较久远，对于新手来说不是很明白和清楚，小弟在此借花献佛，在各位前辈大能的基础上略加总结，希望对需要的人有所帮助。不当之处也请各位指正！ 注意事项 ： 如果你想问有没有什么捷径，能够既保证查找目的基因启动子区域快速、准确、而又简洁方便明了的话，请看本帖最后一页 不过看完请记得顶哦！ 对于要分析的基因，我们需要搞清楚它的一些基本信息，第一步借助NCBI ...

EMSA实验技术探讨EMSA是一个比较复杂的试验技术,由于工作原因接触这个试验技术到现在也有三年多的时间了,做了大概也有几百次吧, 那倒理想的试验结果的同时也碰到了很多莫名的问题和结果,到现在为止还有没有解决的,找不到原因的一个问题,呵呵! 现和smalldonkey商量一下将我对这个实验技术的总结和一个心得写出来给大家分享,批评指正.EMSA实验技术作为一个经典的DNA/protein,RNA/protein的检测 ...

因为看到园子中使用NEB T4 DNA连接酶的老师和同学比较多，也经常就一些连接的问题进行讨论和沟通。今天发一个关于NEB T4 DNA连接酶的一个专题，就使用过程中一些常见问题跟大家讨论一下。也希望各位老师同学能够踊跃参与，如果大家有什么疑问或者好的建议欢迎。一、关于NEB M0202 T4 DNA 连接酶的使用方法和常见问题及解答1、产品特性和使用方法产品说明：该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键 ...

染色质免疫沉淀法（Chromatin immunoprecitation,ChIP)是研究体内ＤＮＡ与蛋白质相互作用的重要工具.它可以灵敏地检测目标蛋白与特异ＤＮＡ片段的结合情况,还可以用来研究组蛋白与基因表达的关系.核小体组蛋白可以发生多种翻译后的共价修饰,如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等,这些共价修饰与真核基因的表达密切相关.根据“组蛋白密码”假说,组蛋白的各种共价修饰的组合,会以协同或拮抗的方式诱导特异的下游 ...

双酶切连接反应之全攻略前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，结合丁香园战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUF ...

【申请置顶】【讲座预告】11月30日 病毒基因工程国家重点实验室 吴小兵博士 病毒载体与基因治疗系列讲座专家讲座活动通知表：主讲人姓名：吴小兵==========================================主讲人个人成就简介吴小兵博士做为课题负责人承担了863计划基因治疗重大关键项目课题“应用于恶性肿瘤基因治疗的新型病毒载体的研制”（2000年结题）和攀登计划课题子课题“用于基因治疗的新型载体的研制”（1999年结题）， 863计划中试项目“rAA ...

很多战友（包括我）对“复杂”的生物学软件和厚厚的软件使用说明书充满了恐惧，以至于始终不能够用它们来提高自己的工作效率。很多不太懂电脑的战友就是被这些复杂的东西吓得永远不敢去用软件的。我们做StepByStep的初衷就是让初学者按图索骥地几分钟之内就学会怎么用一个生物学软件，而更进一步的功能可以在使用中自己去慢慢摸索。StepByStep的中心思想：++++几分钟，一个例子学会一个软件的基本使用！++++目标读者：生命 ...

进了新实验室后一直用Gateway做克隆，发现论坛上很少有讨论gateway的帖子，特开此贴，也欢迎对gateway有经验，有兴趣和有疑问的同行们一起交流经验Gateway官方简介：Gateway®克隆技术的基础是lambda噬菌体的位点特异性重组反应，一种准确保存遗传信息的有效的自然的生化途径。与传统的需要DNA限制性内切酶、DNA连接酶、凝胶电泳和Dundefined*段纯化等多个步骤的单调乏味的亚克隆方法相比 ...

下面是一些分子生物学基础知识，有助于某些实验的理解。E. coli is a Gram-negative, rod-shaped bacterium about 2.5 micrometers long that contains flagella and a genome of 4,639,221 base pairs encoding at least 4000 genes。 The K12 strain was first isolated in 1921 from the stool of a malaria patient and it has been maintained ...