DNA实验技术

质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核外能够进行自主复制的遗传单位，是细胞内的一种环状的小分子DNA，作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外。质粒是分子生物学实验中不可缺少的工具载体。高质量的质粒提取是下游试验顺利进行的可靠保证。质粒制备的方法主要包括以下三个步骤： 细菌的培养及扩增； 细菌的收获和裂解：一般常用碱裂解法。 质粒提取纯化。做过分子生物学实验的,大多数做抽提过质粒，但不是所有人都知道质粒制 ...

请教高手，我做一蛋白的定点突变，采用overlap的方式，但当我把短片段扩出来后，就怎么也不能将全片段（1.58Kb）扩出来，我不知道是不是引物的问题，请大家帮我看看这是整个CD序列：ATGGAACTGAAGGCCGAGGAGGAGGAGGTGGGTGGCGTCCAGCCGGTGAGCATCCAGGCCTTCGCCAGCAGCTCCACACTGCACGGCCTGGCCCACATCTTCTCCTACGAGCG ...

亚硫酸氢盐修饰DNA步骤一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好）EcoRⅠ TaKaRa 消化DNA 37℃ 3hddH2O 11ulH溶液 2ulEcoRⅠ 1ulDNA 6ul37℃ 孵育 3h二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿）1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26 gauge needle 5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性）2.加2.2ul新鲜配制的3M NaOH 到18 ...

极小巧的序列编辑器我自己设计的只有2K的小巧DNA序列编辑器，为网页文件，无需安装，只要有IE即可运行，辅助进行分子生物学序列编辑、引物设计，可生成互补、反向互补、大写、小写序列、编辑空格等。下载地址：ftp://www.souwo.net/DNA_editor.rar后期原作者将提供自己编写的《引物设计教程》下载或者将下列代码复制并存入文本文件并将扩展名改为htm(网页文件）即可。如果调试有效,请多回贴支持进一步的工具发 ...

PCR产物一般都含有过量的引物、Taq DNA酶及dNTP，这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程，因此有必要除去。目前核酸纯化的方法有很多，商用化试剂盒的出现使得DNA的纯化过程变得更加简便快捷。PCR产物纯化回收试剂盒（SunShinecleanTM PCR Product Recovery kit）可简单、快速、有效的从PCR反应或其它各种酶促反应液中纯化Dundefined*段。根据回收片段大小不同，最高回收率 ...

做LAMP实验有一年多的时间了，其间共做了3个关于LAMP的课题，目前为止基本没有污染~尤其是自己的毕业论文，用完了500uL的 FIP，全部开盖跑电涌，没有一次污染。今天为止做完了所有毕业实验，坐下来总结一下自己的心得~~我只是个小硕士生~~所以都是在浅显的方面叙述，希望大家不要鄙视~~首先感谢一下LAMP交流群，没有这么多老师和同伴在，我不可能顺利毕业。。比较可惜的是群里现在人满了。。下面开始正文~~1. 引物我一共用过8组 ...

PROTOCOLS FOR RECOMBINANT DNA ISOLATION, CLONING, and SEQUENCINGedited byBruce A. RoeJudy S. Crabtreeand Akbar S. KhanDepartment of Chemistry and BiochemistryThe University of OklahomaNorman, Oklahoma 73019e-mail: broe@ou.eduphone: 405 325-4912fax: 405 325-7762Augu ...

别人的经验，还不错，大家分享一下吧！载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素a复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。b 抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+c 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段d P/E 启动子/增强子e Terms 终止信号f 加poly（A）信号 可以起到稳定mRNA作用二、 ...

gi|456502|dbj|D17800.1|POYFIMA7 Porphyromonas gingivalis (strain ATCC 49417) fimA gene for fimbrilin,complete cdsLength = 1299Score = 355 bits (179), Expect = 2e-95Identities = 182/183 (99%)Strand = Plus / PlusQuery: 3 taaccataagttcgacatcaacctgacgatcaccggtcctggta ...

上海迈程医疗器械有限公司专业提供DNA/RNA快速提取试剂、HLA高低分辨分型（A,B,C,DR,DQ），B27位点检测及分子生物学耗材试剂。愿意真诚为您服务！请致电：18930640599 mail:jason725@139.com由美国德州生物基因有限公司（Texas BioGene,Inc）生产出新型新型HLA- ABDR SSP Morgan?试剂盒，该试剂根据亚洲人种特点而独特设计，可用于HLA I类A,B位点和Ⅱ类DR位点等位基因低 ...

1.蛋白酶K的作用：由真菌Tritirachium album Limber产生的蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的一般降解。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作 ...

DNA实验室解决方案之PCR室污染监测及防御2012年全国司法及血液中心国际标准DNA实验室观摩会将在明年6月于青岛国际会展中心举行，这次观摩会秉着打造全球顶尖展会的理念，将展示具有世界一流水平，符合国际标准的DNA实验室样板间。并将在展示过程中向参会人员免费发放实验室解决方案，本文就是日前由组委会展示的该系列方案中的一部分。PCR反应最大的魅力是扩增力能与高灵敏度，但易污染一直是困扰各实验室的大问题，极 ...

DNA的重组T载体连接(T/A cloning)(一)、试剂:a.外源片段DNA；b.pGEM®-T easy 载体或pMD18-T 载体。(二)、流程:a.将pGEM®-T easy或pMD18-T离心至管底。b.建立以下连接体系(每次使用前切记将2×Buffer振荡混匀):表格 14、pGEM®-T easy连接体系成份10µl体系20µl体系2×Rapid Ligation buffer最好按照每次用量分装，避免多次冻融。5µl10µlpGEM®-T1µl1µl ...

从外周血提取DNA是一个经常遇到的问题，当然可以用试剂盒提取，不过代价还是有点大，并且不方便，定试剂总要等上几天，如果血液标本不稀缺资源，不妨用一些简便方法提取。方法一(1)取抗凝血5ml在沉淀中加入15ml PBS，混匀，离心2000r/min10min。(2)将血浆转至新的试管中，-70℃保存。(3)将血细胞转入另一支试管中(10ml或50ml)加入尽可能多的冷的蒸馏水混匀。(4)将其插入冰内5～10min或放入-20℃15 ...

1 DNA条带不见或很淡，可能的原因及解决的方法：a DNA marker 上样量不够按照说明书加样，或者根据自己的实验样品调整加样。b DNA电泳跑出凝胶电泳时，将溴酚蓝跑到胶长的2/3处即可停止电泳。更小的DNA片段可能需要电泳的时间更短。比如1/2c DNA条带被示踪染料所遮盖选用不同的电泳loading dye，使待检测的DNA样品避开示踪染料的干扰，或者适当降低loading dye用量。d 凝胶中未加核酸染料，或者后染时核酸染色不均匀 ...

【转帖】染色质免疫沉淀（ChIP）技术的难点及应用本文转自密理博中国博客，转载请注明出处作者：柴晶晶序言随着人类基因组测序工作的基本完成，功能基因组学的研究逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域。研究某个蛋白因子的调控功能，可以通过对蛋白活性（激活或抑制其活性），蛋白数量（过表达Overexpression或基因缺陷型Knockout）, 以及蛋白功能（功能缺陷型蛋白Dominant- ...

(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)技术在活细胞生理条件下无损伤的研究蛋白质-蛋白质间相互作用》FRET基本原理荧光共振能量转移是指两个荧光发色基团在足够靠近时，当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态，在该电子回到基态前，通过偶极子相互作用，实现了能量向邻近的受体分子转移（即发生能量共振转移）。下面以GFP的两个突变体CFP（cyan fluorescent pr ...

绿色荧光蛋白GFP来源及生化特性: GFP 主要来自两种海洋无脊椎动物,西南太平洋水母———Aequorea victoria 和佐治亚沿海水域的三色堇———Renilla renifomis 。上述来源的GFP ,其原始发光蛋白基团具有将蓝色的化学发光演变为绿色荧光的生物发光特性。Plinythe Elder 于公元1 世纪最早报道了这种生物发光现象。20 世纪60 年代以来,Blinks 等实验室先后研究了GFP 的生物化学特性。野生型GFP (wt2GFP) 的分子 ...

如何阅读质粒图谱最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于大家分享。载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。＃ ...

向老外要质粒后的MTA写法向一个牛人要质粒，最后要MTA， 供大家参考：MATERIALS TRANSFER AGREEMENTApril 15, 2008××××× agrees to provide the Recipient Investigator and their Institution identified below (collectively referred to herein as "Recipient") with materials developed at ×××× by ×××× under the foll ...