DNA实验技术

Northern assays require RNA (total- or poly(A)- selected) to be resolved on a agarose gel under denaturing conditions transferred to a membrane and immobilized for subsequent hybridization. Various in ...

Analysis of mRNA expression in tissue or cell culture is often done by Northern blot or ribonuclease protection assay (RPA). Northern assays require the total RNA to be resolved on a denaturing agaros ...

1. Cut 10ug of plasmid DNA where you want the transcript to end.2. Add an equal volume of 2X PK buffer:200mM TrisHCl pH 7.525mM EDTA300mM NaCl2% SDS200ug/ml proteinase K3. 37� for 30min and then extra ...

Microarray analysis and differential display have become popular techniques for identifying differentially expressed genes. Once identified the varying expression levels of specific mRNAs must be conf ...

1. Add appropriate volumes of RNA ( Try 5 and 10 ug RNA plus 600 or 800 pg dig labelled probe.2. Include 2-3 yeast RNA samples/probe used. 2ul of 5mg/ml stock.3. Add 20 ul of Soln. A to all of the tub ...

RNase Protection Assay - ProtocolThis method can be used to detect and quantitate mRNA to map mRNA termini and to determine the position of introns within the corresponding gene. High specific activit ...

End-label oligo (20-25 mer)4 µl 5X T4 Kinase Buffer5 µl ATP (7000 Ci/mmol)10 µl water + oligo (200 ng)1 µl T4 Kinase1. 37 deg C for 1 hour.2. Heat inactivate at 75 deg C for 10 minutes.3. Add 1 µl gl ...

全文下载：http://www.ebioe.com/down/html/down_211.htm陈秀英 彭孝军~A大连理工大学精细化工国家重点实验室 大连 116012)摘 要 介绍了各种DNA 荧光探针的结构特征、荧光性质和与DNA 的作用方式，概述了DNA 探针在生物分子分析方面的应用，并展望了DNA 荧光探针的发展趋势和应用前景。关键词 荧光探针 DNA 花菁染料 光稳定性 量子点DNA F ...

体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或 者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我们了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构/结构域。而利用定点突变技术改造基因，相信大家也非常熟 ...

DNA重组是将外源DNA与载体分子连接，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。DNA重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法。 重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。常用的DNA连接酶是T4噬菌体DNA连接酶，它不但能使粘性末端的DNA分子连在一起，而且能使平末端的双链DNA分子连接起来，但这种连接 ...

一、 目的掌握质粒的小量快速提取法；了解质粒酶切鉴定原理。二、 原理质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子。大小在1~200kb 之间，具有双链闭合环状结构的DNA 分子。主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。他可独立游离在细胞质内，也可整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物 ...

1、植物基因组DNA的分离纯化一、实验原理核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA是双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子，有些噬菌体DNA有时为单链环状分子。95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA ...

实验目的 1、掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法；2、了解制备原理及各种试剂的作用。实验原理 碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性，再将pH值调至中性使其复性，复性的为质粒DNA，而染色体DNA不会复性，缠结成网状物质，通过离心除去。 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染 ...

张宁，王凤山(山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，山东济南250012《中国海洋药物》试验方案 51protocol.com杂志2004年第2期(总第98期)摘要:DNA的提取是分子生物学研究的基础技术，提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。近年来一些新的或改进的DNA提取纯化方法不断出现，本文对从陆生动物、植物、微生物以及海洋生物提取DNA的方法进行综述。关键词: ...

实验目的：　　1．熟悉分子生物学实验的操作特点。　　2．掌握人类基因组DNA提取的基本原理。　　3．熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。　　4．熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。实验原理：　　用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，加入SDS破裂核膜，用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来，经苯酚�氯仿抽提去除蛋白质，无水乙醇沉淀DNA，75%乙醇洗涤DNA沉淀，真空干燥后，溶解于TE中即得 ...

目的意义DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。因此，本实验的目的是学习植物基因组DNA提取方法、原理和DNA的鉴定技术。Ⅰ 植物基因组DNA 的提取（CTAB法）一、原理植物组织中绝大部分 ...

【实验目的】　　1．掌握碱裂解法小量提取质粒DNA的原理和方法。　　2．掌握琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA方法。　　3．熟悉质粒DNA提取与真核细胞核DNA提取的异同点。【实验原理】　　在pH值为12.0～12.6的碱性环境中，在去垢剂SDS的作用下，细菌的细胞壁与细胞膜均破裂，释放出大量的染色体DNA、RNA及质粒DNA。此时，所有双链DNA解聚成单链，但质粒DNA仍保持环状。当pH值恢复到中性时 ...

碱裂解法提取质粒利用的是共价闭合环状质粒DNA与线状的染色体DNA片段在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线状的DNA双螺旋结构解开变性，在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互补链彼此依然相互盘绕而紧密地结合在一起。当加入pH4.8的醋酸钾高盐缓冲液使pH降低后，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链迅速而准确地复性，而线状的染色体 ...

一、原理：在浓氯化钠（1―2mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小，在稀氯化钠（0.14 mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。将抽提得的核蛋白用SDS（十二烷基硫酸钠）处理，DNA或（RNA）即与蛋白质分开，可用氯仿―异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DN ...

李文强 张改生 汪奎 牛娜 潘栋梁西北农林科技大学 陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室 杨凌 7121 00摘要: 以小麦黄化苗为材料 通过简单差速离心、DNaseⅠ处理得到无核DNA 杂质的线粒体 用SDS 和蛋白酶K 裂解线粒体 经酚/氯仿抽提除去蛋白 并用RNase A 消化而得到单纯线粒体DNA(mtDNA)。对所提取的mtDNA 进行紫外吸收光度分析 A260/A280 平均为1.9 ...