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        质粒DNA的提取、酶切与鉴定

        互联网

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        1. DNA 琼脂糖凝胶电泳

        ① 琼脂糖凝胶的制备:称取0.6g 琼脂糖,置于三角瓶中,加入50 mL TBE 缓冲液,经沸水浴加热全部融化后,取出摇匀,此为1.2%的琼脂糖凝胶。

        ② 胶板的制备:取橡皮膏(宽约1cm)将有机玻璃板的边缘封好,水平放置,将样品槽板垂直立在玻璃板表面。将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液,小心倒入凝胶液,使胶液缓慢展开,直到在整个玻璃板表面形成均匀的胶层,室温下静置30 min,待凝固完全后,轻轻拔出样品槽模板,在胶板上即形成相互隔开的样品槽。用滴管将样品槽内注满TBE缓冲液以防止干裂,制备好胶板后立即取下橡皮膏,将胶板放在电泳槽中使用。

        ③ 加样:用微量加样器将上述样品分别加入胶板的样品小槽内。每次加完一个样品,要用蒸馏水反复洗净微量加样器,以防止相互污染。

        2. 电泳

        加完样品后的凝胶板,立即通电。样品进胶前,应使电流控制在20mA,样品进胶后电压控制在60~80V,电流为40~50 mA。当指示前沿移动至距离胶板1~2cm 处,停止电泳。

        3. 染色

        将电泳后的胶板在EB 染色液中进行染色以观察在琼脂糖凝胶中的DNA 条带。

        结果与观察

        在波长为254nm 的紫外灯下,观察染色后的电泳胶板。DNA 存在处显示出红色的荧光条带


        4. DNA 琼脂糖凝胶电泳

        ① 琼脂糖凝胶的制备:称取0.6g 琼脂糖,置于三角瓶中,加入50 mL TBE 缓冲液,经沸水浴加热全部融化后,取出摇匀,此为1.2%的琼脂糖凝胶。

        ② 胶板的制备:取橡皮膏(宽约1cm)将有机玻璃板的边缘封好,水平放置,将样品槽板垂直立在玻璃板表面。将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液,小心倒入凝胶液,使胶液缓慢展开,直到在整个玻璃板表面形成均匀的胶层,室温下静置30 min,待凝固完全后,轻轻拔出样品槽模板,在胶板上即形成相互隔开的样品槽。用滴管将样品槽内注满TBE缓冲液以防止干裂,制备好胶板后立即取下橡皮膏,将胶板放在电泳槽中使用。

        ③ 加样:用微量加样器将上述样品分别加入胶板的样品小槽内。每次加完一个样品,要用蒸馏水反复洗净微量加样器,以防止相互污染。

        5. 电泳

        加完样品后的凝胶板,立即通电。样品进胶前,应使电流控制在20mA,样品进胶后电压控制在60~80V,电流为40~50 mA。当指示前沿移动至距离胶板1~2cm 处,停止电泳。

        6. 染色

        将电泳后的胶板在EB 染色液中进行染色以观察在琼脂糖凝胶中的DNA 条带。

        五、结果与观察

        在波长为254nm 的紫外灯下,观察染色后的电泳胶板。DNA 存在处显示出红色的荧光条带。

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