DNA实验技术

相关专题 　　DNA结构 — 概述 　　DNA由两个链状分子(多聚核苷酸)围绕彼此旋转，形成了典型的双螺旋结构。细胞通过把四种核苷酸连接在一起形成多聚核苷酸链。用来构建DNA链的核苷酸有腺嘌呤(A)，鸟嘌呤(G)的胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。DNA储存用来制造细胞使用的多肽的信息。DNA链上核苷酸的顺序(称为基因)说明了多肽链上的氨基酸的 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 　　DNA双螺旋结构：极其复杂的新发现 　　DNA双螺旋结构是有史以来最伟大的科学发现之一。DNA分子是建立每个生物体生理特征的最著名的遗传分子，它是由詹姆斯•沃森和弗朗西斯•克里克在1953年发现的。直到2001年中期，人类基因组计划和塞莱拉基因组公司才联合发表了DNA分子的真正性质 ...

相关专题 　　简并引物设计的方法(包括实际操作步骤)简并引物是指用来编码一段短肽序列的不同碱基序列的混合物。主要用来同源克隆未知的基因，或用来分析某一种基因多态性的一种方法。 　　简并引物设计的常见程序如下： 　　1. 利用NCBI搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列。 　　因为密码子的关系，不同的核酸序列可能表达的氨 ...

相关专题 　　引物设计原则： 　　1。长度 一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不能大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，即Taq酶的最适温度 　　2。碱基分布的均衡性 同一碱基连续出现不应超过5个 　　GC含量一般40-60% 　　GC含量太低导致引物Tm值较低，使用较低的退火温度不利于提高PCR的特异性 　　GC含量 ...

相关专题 引物设计 问题四：如何利用MRNA序列和DNA序列，用PRIMER 5查找已知引物的产物位置，并确定其是否跨内含子。 1)找到目的引物的DNA序列和MRNA(cdna)序列，以问题三中用primer-blast设计的第8条引物为例。 2)打开PRIMER 5，将CDNA序列贴入-》点击primer-》显示primer primer ...

相关专题 引物设计 什么是引物二聚体?怎样消除引物二聚体? 引物二聚体是引物的3'端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度，降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。 减少PCR产物中引物二聚 ...

相关专题 引物在PCR反应中处于关键作用，引物决定着扩增的特异性和扩增的效率。而在目前DNA的化学合成技术非常成熟的情形下，引物设计是否合适是我们应更为关注的层面。现在有很多的免费的软件或网络资源(http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)能辅助我们进行引物设计，这使我们总能找到适合我们自己应用的引物设计工具。笔者用 ...

相关专题 引物设计 测序引物设计时的注意事项： 1， 对特异性的标准掌握更严格一些，也比普通PCR引物设计时更优先考虑特异性。因为如果在测序反应中，如果引物与模板在非预期位置退火并引发链延伸，会对结果对来很大的干扰甚至造成结果无法识读。 2， Tm值适当高一些。现在大部分测序反应均选用耐热的测序级DNA聚合酶来催化，并采用PCR的热循环程序。 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 我们拟提出脱氧核糖核酸(DNA)盐的一种结构。这种结构的崭新特点具有重要的生物学意义。 鲍林和考瑞曾提出过一个核酸结构。他们在发表这一结构之前，欣然将手稿送给我们一阅。他们的模型包含磷酸接近纤维袖，碱基在外周的三条多核苷酸链。我们觉得这样的结构是不够满意的，其理由有二：(1)我们认为进行过X射线衍射分析 ...

相关专题 引物设计 ...

相关专题 引物设计 如何测定引物的OD值 用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2-0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1ml并在1ml标准比色皿中测定其吸光度，即为所测体积的OD值，进而可以计算出 ...

相关专题 引物纯化方式有哪些，如何选择? ◆　C18柱脱盐：有人称其为简易反相柱，它对DNA有特异性的吸附，可以被有机溶解洗脱，但不会被水洗脱，所以能有效地去除盐分。它不能有效去除比目的片段短的小片段。实际上，它是一种脱盐的作用。这种方法一般不会对普通PCR反应产生影响。对于需要用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。 ◆　OPC纯化： OP ...

相关专题 引物设计 1.引物的OD数如何定量? 答：引物合成引物OD数是这样测定的：用紫外分光光度计，波长260nm，石英比色杯，光程为1厘 米，测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度最好稀释到0.2-1.0之间。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，用1ml水稀释测OD值。需要根据 稀释倍数换算出母液的OD值。 2.需要合成多少OD数? ...

相关专题 1868年，瑞士的内科医生Friedrich Miescher从外科医院包扎伤口的绷带上的脓细胞核中提取到一种富含磷元素的酸性化合物，将其称为核质(nuclein);后来他又从鲭鱼精子中分离出类似的物质，并指出它是由一种碱性蛋白质与一种酸性物质组成的，此酸性物质即是现在所知的核酸(nucleic acid)。 1944年Oswal ...

相关专题 质粒 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重 ...

相关专题 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些嗜菌体DNA有时为单链环状分子，RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子，不同类型的RNA分子可以具有不同的结构特点，如真核mRNA分子多数在3’端带有poly ...

相关专题 【基本原理】 利用DNA连接酶把目的DNA片段和载体DNA连接在一起，成为一个新的重组分子。目的DNA片段被限制酶消化后其末端只可能有3种形式： (1)带有相同的粘性末端：用同一种酶或同尾酶处理可得这样的末端。由于质粒载体也必须用同样的酶消化，亦得两个相同的粘性末端，因此在连接反应中，外源目的基因片段和质粒载体DNA均可能发生自身 ...

相关专题 1.5×CTAB CTAB 15 g 1 M Tris·Cl (pH 8.0) 75 ml 0.5 M EDTA 30 ml NaCl 61.4 g add ddH2O to 1000 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0) EDTA-Na·2H2O 186.1 g NaOH ~20 g Adjust to pH 8.0 d ...

相关专题 一、试剂 1 、 10 × TBE ( pH 8.3 )： 2 、 46% 尿素溶液： 3 、 20% 聚丙烯酰胺溶液 4 、 10% 过硫酸胺 5 、引物 6 、模板 7 、 DNA 聚合酶 8 、放射性标记的 dNTP 和 ddNTP 贮存液 9、TEMED 二、操作方法 (一)由双链质粒制备单链DNA膜板 取质粒 DNA ( ...

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