DNA实验技术

相关专题 PCR基础 聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。模板可以为纯化的基因组或质 ...

相关专题 错配PCR-限制性片段长度多态性分析检测HBV前终止密码变异株技术的建立及临床应用　周伯平 徐六妹 王火生 付涌水 李卫宁 韩红星 马为民 袁 静深圳市东湖医院 深圳市肝病研究所 518003　摘要 采用错配聚合酶链反应(mpPCR)对HBV前C区基因进行扩增，对PCR产物进行限制性片段长度多态性分析(RFLP)，鉴定前C区第83位 ...

相关专题 　　幽门螺杆菌（Hp）感染在人群中广泛存在，Hp的分型鉴定对其感染的临床及流行病学研究具有重要意义。国外文献报道的几种基因型技术使Hp的分型鉴定成为可能，而PCR及单链构象多态性（Signle-strand conformation polymorphismsSSCP）分析在菌株分型鉴定中的应用则尚未见报道。作者采用PCR-SSCP ...

相关专题 【实验目的】 掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法 【实验原理】 DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解，产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸，后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物，其反应如下图。 蓝色化合物在595nm处有最大吸收，且DNA在40µg ~400µg范围内时，吸光度与DNA ...

相关专题 一、 目的 熟练掌握抽提细菌DNA的一般方法 二、原理 要进行重组DNA 实验，就离不开外源基因的纯化，而外源基因主要来源之一就要直接从生物的染色体DNA上制备，所以制备高质量的染色体DNA样品经常为基因工程实验所需要，抽提细菌染色体DNA的方法目前已有许多种，这里所介绍的两种方法：一适用于枯杆菌染色体的抽提;另一种方法则适用于大 ...

相关专题 自然界绝大多数生物体的遗传信息贮存在DNA的核苷酸排列顺序中。DNA是巨大的生物高分子，一般将细胞内遗传信息的携带者棗染色体所包含的DNA总体称为基因组(genome)。同一物种的基因组DNA含量总是恒定的，不同物种间基因组大小和复杂程度则差异极大，一般讲，进化程度越高的生物体其基因组构成越大、越复杂，见表。 某些有代表性的生物体 ...

相关专题 【实验目的】 学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法 【实验原理】 1.从动物组织和细胞中提取DNA DNA存在于细胞核中。提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情 ...

相关专题 实验目的 1. 学会DNA限制性内切酶酶切技术。 2. 琼脂糖凝胶电泳法观察酶切DNA的结果。 实验原理 质粒pUC118上有限制性内切酶BamHI的识别序列G↓GATCC，用BamHI酶切后形成线性质粒DNA。琼脂糖凝胶电泳可以按酶切产物分子量的大小分离DNA片段，小片段比大片段迁移快，凝胶上迁移的距离 ...

相关专题 实验目的 1．掌握DNA连接的的方式和影响连接反应的因素。 2．学会DNA回收和连接技术。 实验原理 将载体pUC118 用BamHI + EcoRI酶切，与目的基因1.0kb BamHI + EcoRI片段用T4DNA连接酶连接起来。图5-1 目的DNA与质粒连接示意图 ...

相关专题 赵卫晏辉钧张文炳 方丹云周经姣胡琼龙北国江丽芳摘要:目的:对该实验室已建立的检测SARS 冠状病毒多聚酶基因的套式RT - PCR 方法进行优化。方法:从SARS 病人的嗽口水标本中提取RNA 调整套式PCR 的退火温度扩增SARS 冠状病毒多聚酶部分基因。扩增出的阳性片段连接入pGEM- T载体中测序后比较其与已知SARS 冠状病 ...

相关专题 一、实验方法 1、鸡基因组DNA的提取 2、目的基因的PCR扩增 3、内切酶消化PCR产物 4、琼脂糖凝胶电泳（检测基因型）PCR扩增 1、引物设计（Genbank）； 2、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR） ...

相关专题 Autoclave method for rapid preparation of bacterial PCR-template DNA 用高温高压灭菌锅法快速制备细菌PCR模板DNA Keith E. Simmon Dewey D. Steadman Sarah Durkin Amy Baldwin Wade H ...

相关专题 目的： 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法。原理： 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计 ...

相关专题 (辽宁省刑事科学技术研究所　沈阳　110032)摘　要　DNA 多态性分析技术是当前法医生物物证鉴定中最主要的技术手段并由此诞生法医分子遗传学这一新生学科。本文对法医DNA 多态性分析技术的诞生、技术种类、科研进展、重大应用进行综述报道。关键词　DNA 多态性分析　法庭科学　进展与应用1 　法医DNA 分析技术的诞生和发展DNA 是 ...

相关专题 一．实验目的及背景在生物技术实验中，PCR反应获得的目的片段，酶切后所得特定的DNA序列， 分子杂交中所制备的探针等，经过琼脂糖凝胶电泳后，目的片段与其它DNA分开， 这就需要有一套方法将目的DNA从凝胶中分离出来，通过处理后得到纯化的目的DNA， 以用于以后分子杂交，重组子构建，序列分析等.从凝胶中分离回收DNA的方法现在常用的技 ...

相关专题 实验目的 从上个实验中转化成功的军中提取出已经到克隆的质粒，为下一步双酶切做好准备。我们重点是要保证治理的序列、产率和纯度，去除Dnase、机械、物理、化学因素的影响。并且学习和掌握碱裂解法提取质粒的基本原理和实验技术方法。实验原理及过程 实验步骤 实验原理 1将含pETBlue－2的单菌落接入3mL LBAmp+液体培养基 ...

相关专题 实验目的 从新鲜的小鼠肝脏中提取基因组DNA，为southern杂交或DNA文库的构建做好准备。我们重点是要保证DNA的序列、产率和纯度，去除Dnase、机械剪切（对于如此之大的基因组，防止机械剪切是很重要的）、物理、化学因素的影响。实验原理及过程实验步骤实验原理1将饥饿一天的小鼠用脊髓脱臼法处死。饥饿一天是为了减少肝中的糖原， ...

相关专题 回收率低或为零 1. 漂洗缓冲液中没加入乙醇.在使用前应确保乙醇已加入漂洗液PW中。 2. 吸附材料上有乙醇残留.洗脱时硅胶膜或硅胶树脂上有漂洗缓冲液残留，因含乙醇会降低洗脱效率。在洗脱前可通过再次离心或置于50℃烤箱中5-10分钟，彻底去除漂洗缓冲液。 3. 洗脱缓冲液pH值偏低.DNA只在低盐bu ...

相关专题 一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨 ...

相关专题 5.1实验原理 5.1.1聚合酶链式反应（PCR）的基本构成 PCR指在引物指导下由酶催化的对特定模板（克隆或基因组DNA）的扩增反应，是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应用，包括用于DNA作图、DNA测序、分子系统遗传学等。 PCR基本原理是以单链DNA为模板，4种dNTP为底物 ...