更多资讯

Western Blot（WB）又称蛋白质免疫印迹法，是基于蛋白质SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白的特性，通过显色技术检测目的蛋白的技术。该技术主要应用于以下场景：(1)检测目标蛋白；(2)定量或定性地确定细胞或组织中蛋白质的表达；(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA和蛋白质-RNA相互作用的后续分析。实验步骤多，关键点多，耗时长，每一步都可能影响实验最终结果，小编今天主要为大家介绍WB底物显色方法的选择。底 ...

起三氯生（triclosan，TCS）这个化学名称，对于大多数中国消费者来说还非常陌生。普通人很少知道，三氯生是一种广谱抗菌剂，广泛被添加在牙膏、肥皂、除臭剂、漱口水、剃须膏等日化用品中。其中，牙膏更是三氯生的添加「大户」。 在 2016 年，美国食品和药物管理局下令将三氯生从家庭和医院环境中使用的洗手产品中移除，主要原因是考虑到三氯生会导致更多的耐药细菌。事实上，有关三氯生安全性的争论一直存在，早在 2005 年就曾有过关于三氯生牙膏安全性存疑的新闻。 2021 年 1 月 10 日，由北卡罗来纳大学教堂山分校、马萨诸塞大学阿默斯特分校和香港浸会大学领导的一个国际研究小组，在 Nature Communications 上发表了题为 Microbial enzymes induce colitis by reactivating triclosan in the mouse gastrointestinal tract 的研究性论文，在小鼠上进行研究，证明了三氯生如何引发肠道炎症。研究内容 小鼠肠道中独特的三氯生代谢谱 研究者首先试图确定肠道是否表现出与其他组织不同的三氯生代谢特征。

近日，中山大学中山眼科中心的柳夏林教授团队在国际著名期刊 Science Advances 杂志上以 Research article 发表题为 miR-204-containing exosomes ameliorate GVHD-associated dry eye disease 的研究论文，首次报道了富含 miR-204 的外泌体可有效缓解慢性移植物抗宿主病相关性干眼症状和体征，并发现间充质干细胞外泌体（MSC-exo）通过其富含的 miR-204 靶向调控眼表巨噬细胞，重塑眼表微环境，缓解慢性移植物抗宿主病相关性干眼，为干预这类难治性干眼疾病提供新策略。慢性移植物抗宿主病（cGVHD）相关性干眼是造血干细胞移植后的主要并发症，40%-90% 的 cGVHD 患者有干眼症表现，多诉眼干涩、异物感、疼痛、视物不清甚至引起失明，症状迁延不愈，严重影响患者的生活质量，临床上目前主要应用激素、免疫抑制剂、人工泪液等治疗，疗效欠佳，属于难治性干眼。由于 cGVHD 干眼发病机制复杂，现阶段缺乏满意的疗法，亟需探寻更有效的治疗方式。间充质干细胞（Mesenchymal stromal ce

随着全球肥胖症的日益严重，含人工甜味剂的「无糖饮料」越来越受到广大消费者的青睐。它们被宣传只含有很少的热量甚至零热量，不仅满足了消费者对甜味的渴望，而且还不用担心会发胖，因此深受大家的喜爱。然而，这可能仅仅是一场空欢喜。2021 年 9 月 28 日，发表在 JAMA Network Open 上的一项研究，来自美国南加州大学凯克医学院领导的研究团队，发现女性和肥胖者可能对人工甜味剂更加敏感。这就意味着人工甜味饮料反而会让他们感到饥饿，食欲大开，吃得更多，从而导致体重增加。大量研究表明，人类和动物更喜欢营养糖，而不是无热量的甜味剂。二十年前，在小鼠口中发现甜味感受器后不久，科学家们试图敲除这些味蕾，但令人惊讶的是，即使没有味觉，老鼠仍然能以某种方式辨别天然糖，而且他们更喜欢天然糖，而不是人造甜味剂。那么为什么人造甜味剂不能抑制人们对糖的渴望呢？最近的研究，为我们揭开了这个谜题的答案。2022 年 1 月 13 日，来自美国杜克大学的 Diego V. Bohórquez 团队在 Nature Neuroscience 杂志上发表了题为 The preference for sugar

导读 CRISPR/Cas 系统为细菌提供了适应性免疫，同时其准确识别和切割特定 DNA 和 RNA 序列的能力也为植物、动物和微生物基因组编辑提供了强大的工具。目前，基于 CRISPR-Cas9 基因编辑的多项临床实验也已启动并获得突破性结果，为许多遗传疾病的治疗开辟了新的途径。 德国马克斯·普朗克病原学研究所的 Emmanuelle Charpentier 以及美国加州大学伯克利分校的 Jennifer A. Doudna 也因为开发了这一最重要的基因组编辑方法而摘得 2020 年诺贝尔化学奖的桂冠。 近年来，CRISPR/Cas 相关的研究也取得巨大的进展，其中多项研究均发现了一个包含 RuvC 的 Cas 蛋白家族，被称为 Cas12，其变体表现出不同的生化和细胞活性。 其中，Cas12c 最初发现于肠道宏基因组的小 DNA 片段中，虽然与其他 DNA 切割 Cas12 酶存在共同的特征，但这种蛋白质的一些生化特性仍然是未知的：比如其 RNA 识别和加工的机制尚不清楚；此外，由于缺乏可检测到的 DNA 酶活性，Cas12c 是否或如何为细菌提供抗病毒保护仍然是有待回答的问题。

咖啡是全球消费最广泛的饮料之一，人们对其健康影响的兴趣由来已久。已有研究表明，咖啡可能会降低心血管疾病、2 型糖尿病、阿尔茨海默病、癌症等疾病风险，并表明咖啡摄入量与降低死亡风险之间存在关联。 但是，在过去的研究中，并没有对无糖咖啡与加糖/人造甜味剂的咖啡进行区分。而在日常生活中，许多人会选择加入糖来掩盖黑咖啡原有的苦味。那么，加糖之后的咖啡，会对健康有什么影响呢？ 为了评估不加糖的、加糖的和加人造甜味剂的咖啡与全因和特定原因死亡率之间的关系，来自中国南方医科大学的毛琛团队进行了相关研究，并于 2022 年 5 月 31 日在 Annals of Internal Medicine（IF = 25.391）上发表了题为 Association of Sugar-Sweetened, Artificially Sweetened, and Unsweetened Coffee Consumption With All-Cause and Cause-Specific Mortality 的论文。 研究发现，适量摄入加糖咖啡可能对人没有坏处。在 7 年的随访期间，与不喝咖啡的人相比，喝适量

生命早期的免疫微生物相互作用：长期健康和免疫疾病的决定因素人体是丰富多样的微生物（细菌、病毒、真菌等）的宿主，彼此之间形成了非常复杂的关系网络。大部分微生物组存在于肠道中，皮肤、口、鼻、肺、生殖道中也都存在不同的微生物群落。人体微生物组在维持体内平衡方面具有重要作用，已有不少研究揭示了微生物群对人体健康的重要影响。今日，Science 杂志推出了微生物群的相关特刊，三篇观点文章和三篇综述概述了目前对各种人类微生物群落的理解，并探讨了有待发现的内容。「了解生态以及宿主与其微生物群之间的交叉对话机制，提供了一种更全面的人类健康观，未来将有助于预防和治疗一系列人类疾病」，Science 高级编辑 Priscilla Kelly 这样写道 [1]。6 篇文章从微生物群-脑轴、口腔微生物、皮肤微生物等多个角度展开。微生物群-脑轴在 John Cryan 和 Sarkis Mazmanian 撰写的观点文章中，强调了肠道细菌与大脑发育和功能之间的关系，包括动物的情绪、运动和认知行为。虽然越来越多的研究说明了这些联系，但微生物群——脑轴中涉及的潜在机制和途径尚未完全了解 [2]。图片来源：参考文献

[图片]

固定和透化 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次，每次 3 min。 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min，1 × PBS 浸洗玻片 3次，每次 3 min。 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）, 1 × PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min。封闭吸水纸吸干 1 ×PBS，在玻片上滴加 5% 的正常血清（与二抗种属来源一致或相似），室温封闭 1 h。抗体孵育 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4 ℃ 孵育过夜。加荧光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中 37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min。注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。固定拍照 复染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，对标本进行染核，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI。 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液

完成投稿后，早期可能会有编辑联系格式更改事宜，然后就进入了漫长的等待。有一种情况，经过几天乃至数周后，收到了稿件转投建议（Journal Transfer Recommended）或因与期刊 Scope 不契合而直接被拒稿。随着转投他刊，意味着文章格式、图标部署和行文思路等都将进行一定程度的修改，这一过程浪费了许多时间。因此，可以在正式 Submission 之前，给目标期刊写封邮件，进行一次 Pre-submission enquiry。在初步调查并选定目标期刊后，可以通过邮件询问的形式（个别期刊或特刊也会开放相应的系统或由组稿编辑直接负责，如 Nature、NEJM 和 Frontiers 系列期刊等）来了解期刊是否对这篇论文感兴趣。与正式投稿不同，Pre-submission enquiry 可以有针对性地写给多家心仪期刊，根据答复情况再进行正式投稿。这种咨询对自己较为熟悉的、经常投稿的领域或期刊帮助不大，而对于交叉学科、新接触的领域、新的研究技术、非约稿的综述、期刊强制要求（如 NEJM 的某些板块）和其他拿不准的情况大有裨益。 一、主要内容一封 Pre-submission

一、标题在提一个临床问题时，我们可采用国际上常用的 PICOS 原则：P-patientor population：特定的患病人群/临床问题，即患者或人群。I/E-intervention/exposure：干预措施/暴露因素，如诊断治疗方法。C-comparison/control：对照措施或另一种可用于比较的干预措施，即比较因素。O-outcome：结局，即干预措施的诊疗效果。S-studydesign：研究设计方案。了解以上原则之后，先按照 PICOS 原则，把关键词列出来，然后组合到一起是临床研究最常用的起题目的方式。关于题目的字数：题目的长短，每个杂志都有规定，尽量不要超过规定的词数，通常不要超过 100 字母或 10~12 个英文单词。最后一个重要的问题，标题中往往需要表明研究类型：前瞻 OR 回顾？单 OR 多中心？队列研究 OR 病例对照？真实世界 OR RCT？很多同学在写论文的时候都会犹豫并淡化临床研究的类别，甚至说错自己的研究类别。 二、摘要总听到有的老师讲「摘要的结构化」，到底什么是摘要的结构化，今天我们就来看看标准结构的摘要，长什么样子？1. 多少字？中文：

做完实验/试验，写好文章，下一步就该选刊投稿了。数千份 SCI 杂志，有的人一投即中，即使被拒也能迅速找到下家；有的人却屡投稿屡被拒，选个杂志耽搁大半年！其实，选刊是非常需要技巧的，今天，笔者就给大家分享一些小技巧。 一、对自己工作的恰当认识选刊第一步，心里要要清楚自己的实验/试验设计及工作量大概能发什么样的期刊。自己判断不了可以通过和有经验的人交流，或自己多看文献来判断。否则明知道是 3 分文章的工作量，去投 5 分，10 分的杂志，基本就是浪费时间。因而，认清楚现实再选择契合研究领域，和自己水平相当的期刊很重要。 二、选刊投稿工具有了基本的定位后，就可以借助一些高效工具来缓解自己的工作压力。这里主要介绍两个网站。1. Jane网址：jane.biosemantics.org图片来源：网站截图Jane 的全称是 Journal\Author Name Estimator。从 Welcome to Jane 的介绍我们可以看到它的定位很清晰，目的就是帮助作者选刊，并且还可以很方便地找到与自己类似的文章，了解他们的观点，以便引用到自己的论文中。左上角可以选择输入你自己文章的关键词，标题或

常言道：一图胜千言。科研论文中更是如此。图片作为论文的门面，须得规范，非得要「西装革履」「衣冠楚楚」才行，绝不能「胡子拉碴」「不修边幅」。可惜许多刚刚踏入科研之门的萌新，并不了解科研论文图片的制作规范，甚至许多好不容易熬到毕业季的老腊肉，也是一知半解，云里雾里。接下来，笔者就从一个具体例子出发，和大家系统性的说一下，规范科研论文组图的流程。我们来看看下面这张组图（图 1）。这张图乍看还 OK，但其实很不规范。比如说：图片大小不统一、线条和字体大小粗细不统一、图片模糊等等，像个不修边幅的抠脚大汉。那么今天，笔者带大家将其修改规范，从而符合科研论文图片的要求，华丽变身成为「衣冠楚楚的职场精英」。图 1（图片来源：橙医生）在修改之前，我们需要了解几个基础知识： 一、基础知识1. 科研论文图片的物理尺寸和一般要求正如人有身高、声音等很多特征，一张图片有很多属性，如宽高、像素、分辨率。首先，我们一定要牢记在心的是，当我们进行组图排版时，一定要基于图片的物理尺寸，即整张组图的长宽是多少（厘米）、组图里面每张图片的长宽是多少（厘米）。就像我们用 Word 文档时，一般情况下也是基于 A4 纸的大小去

1、 外泌体已成为生命科学/基础医学研究一大热点2018 年国自然基金评审结果已尘埃落定，其中医学科学部共计有 9830 项获得了基金委资助。从数据来看，热门的几个方向依然火热：外泌体、非编码 RNA、表观遗传、肠道菌群、m6A、CRISPR/Cas9 技术等，其中，涉及到外泌体的研究项目 401 项，总资助经费 1.7 亿元。哈尔滨医科大学李悦教授「外泌体 miRNAs 介导细胞间应答网络调控心房代谢重构在心房颤动中的作用与机制」获得了重点项目资助。外泌体中标项目呈逐年增长的态势，其炙手可热的程度从科学网的统计数据可见一斑。1）近 10 年外泌体相关基金项目年度中标量2）近 5 年外泌体相关基金项目年度中标金额2、何为外泌体，外泌体的生物学功能外泌体是多泡体限制性膜与细胞质膜融合而释放的脂质双层膜囊泡，直径约 30～200 nm，电子显微镜下呈双凹碟形或杯状，外泌体能够运载其内源性的蛋白质、脂质、核酸、miRNA 等信息物质参与细胞间通讯和机体的生理代谢过程，被认为是细胞间通讯、疾病诊断和预后循环生物标志物的重要载体，在临床诊断和治疗方面展现出了极具前景的研究价值。外泌体通过其携带的

第一步细胞培养：外泌体来自于细胞，必须先从源头抓起，高质量的细胞及上清液产出高质量的外泌体。收集上清的细胞培养原则：在细胞健康正常生长的前提下，尽可能的减少血清外泌体或是不使用血清。 培养条件 优点缺点1含血清的完全培养基✘ 血清中含有大量异源外泌体2含去外泌体血清的培养基✔营养相对丰富去外泌体血清难以做到 100% 的去除的，因此即使 1% 的血清外泌体残留也带来大量的异源外泌体3基础培养基（DMEM、1640、F12 等）✘ 此种培养条件细胞处于饥饿状态，会将培养基中的营养物质（包括外泌体）全部消耗掉的，上清液中的外泌体含量低。4外泌体专用无血清培养基✔不含异源外泌体常见的肿瘤细胞培养通常都可以维持生长，而那些血清培养都困难的细胞就难以通用了，需要通过预实验摸索。第二步细胞上清液预处理：获得高质量外泌体预处理也很重要。细胞上清液中有什么物质？除了我们感兴趣的外泌体外，还有少量细胞、细胞碎片、游离蛋白、脂类等。需要做的就是通过差速离心尽可能的去除一些杂质物，先用 800 ~ 1000g 左右的离心力 10 分钟有效去除细胞残留，取上清后，再 8000 ~ 10000g 离心 10 分

一、样本制备原则1、代表性和一致性原则取样的代表性和一致性关系到实验结果是否具有科学意义，应根据实验目的慎重选择取样方案。应做到实验组与对照组的样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致，保证实验结果的可信度。2、准确性原则准确记录代表性样本的各种特征数据，按要求（低温、迅速）采集、制备、贮存、运输，最终正确地按实验设计进行实验和数据处理。3、迅速性原则样本质量影响实验结果的最关键因素，在采集、制备、贮存、运输过程中应尽可能地做到迅速，最大限度的缩短从样本采集到实验的时间。4、低温原则所取样本离体后，应尽快置于干冰或-80℃冰箱中，并保证在实验前始终处于-70℃以下， 以避免外泌体降解。二、样本制备指南1、细胞上清1)细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在70%-80%，悬浮细胞密度在60%-70%；2)对于贴壁细胞，去除原有培养基，加入适量的PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除血清；对于悬浮细胞，300 g ，4℃，10 min 收集细胞，然后换为新的不含外泌体的培养基或者无血清替代培养基继续培养24-48 h， 根据细胞的生长速度确定收取上清时间；3)收集细胞

首先，从细胞的培养过程下手。外泌体来自细胞，因此必须先从源头抓起。大部分的细胞培养过程中都是带有血清的，无论是牛血清、马血清等都是含有异源外泌体的，而我们研究的目标通常是细胞所分泌的外泌体，因此需要尽可能的去除这些异源外泌体的干扰。那么我们需要怎么做呢？这里需要了解一个大原则：在细胞正常生长的条件下，尽可能的减少血清外泌体或者不使用血清。方法一，可以通过超速离心的方法去除血清中外泌体。方法二，通过外泌体专用无血清培养基来替代完全培养基，维持细胞一段时间的生长后收集细胞上清液。但是这两种方法都会存在一定的不足的，去外泌体血清难以做到 100% 的去除的，因此即使 1% 的血清外泌体残留也带来大量的异源外泌体，而外泌体专用无血清培养基，也不是适合所有的细胞，常见的肿瘤细胞培养通常都可以维持生长，而那些血清培养都困难的细胞就难以通用了，所以也需要一些预实验的摸索。还有，那些 DMEM、1640、F12 的基础培养基是否可以替代血清或者外泌体专用无血清培养基呢？这样是不行的。因为细胞在这些基础培养基的环境下，是处于饥饿状态的，细胞会将培养基中的营养物质（包括外泌体）全部消耗掉的，这时的上清液中

当人们在线阅读一份研究稿件时，首先要看的往往就是摘要。它也是同行评审中的一个决定性因素，其重要性不容忽视。当你完成了整篇论文的写作，所有那些为你的研究所投入的时间终于得到了体现。科研写作可能并不容易，但是坚持住，万里长征只差最后一步了——别忘了写好摘要！摘要有时可能会被忽略，但这并不意味着它不重要。事实上，一些研究人员认为摘要是论文中最重要的部分之一。取决于摘要写得如何，它可能是你的读者最先阅读的内容，也可能是被阅读的最后内容——只看完摘要，读者便不再继续阅读了。同时，出版物和期刊也会根据摘要来决定是否要发表你的研究，至少是决定性因素之一。因此，了解如何写好摘要是非常有必要的。 一、什么是摘要？摘要是对研究论文中主要发现的简明总结。它通常出现在一篇研究论文的开头。一篇好的摘要应该能够让普通读者对整篇论文中的主要发现有一个清晰的认知。摘要通常为一段，但有时也可对其进行适当的分段，这取决于你如何组织它的结构。你的目标期刊可能有具体的投稿指南，对摘要的结构做了要求。但是，所有的摘要都有一个共同点，那就是对长篇幅的研究论文进行简要的总结。1. 摘要的常见类型根据格式，摘要主要可以分为结构式摘要

一般来说，没有人比科研人员自己更清楚自己的研究内容。但当科研人员作为论文作者，将其研究内容撰写成科研论文，从论文投稿至期刊，到经历同行评审，再到最终录用、发表出来，乃至被整个学术领域的科研人员阅读、参考的整个过程中，就不再仅仅涉及论文作者自己了。由于认知偏差的存在，或许作者自己觉得已将论文阐述得十分清楚，但对于期刊编辑、审稿专家和其他读者来说，他们对于论文的理解，未必和作者期待清晰传达的内容完全一致，若造成困惑甚至误解、歧义，则可能影响审稿专家对论文的评审意见，也可能令读者失去继续阅读的兴趣。所以，在写作论文时，一个重要的建议就是，心里时刻想着你的读者，时刻站在便于读者理解和阅读的角度，去呈现、阐述、解释和论证。每每当写完一些段落的初稿时，尝试从旁观者或审稿人、读者等的视角，以「换位思考」角度去重新审视自己的文章，可能更容易发现那些表述仍需修改完善的地方。 一、标题和摘要：吸引注意力的第一印象对于稿源充足、每天可能处理几十篇新收稿件的期刊编辑，和有着繁重的科研任务、同时兼任同行评审任务的审稿专家来说，标题和摘要，往往是他们对稿件进行初步筛选的第一步。每位作者都希望自己的论文被尽快录用发

不少作者发现，辛苦做了实验，认真写了稿件，终于可以开始投稿时，却一脸迷茫不知该投稿至哪个期刊。从种类繁多、数量庞大的学术期刊中选出适合自己投稿的目标期刊，确非易事。此外，一些问题期刊或掠夺性期刊（predatory journals）的存在，不仅扰乱了正常的学术出版秩序，还给不善于有效选择目标期刊的作者带来不小的麻烦，一不留神可能就掉进了问题期刊的投稿「陷阱」。那么，如何识别问题期刊或掠夺性期刊，防止投稿时「踩坑」呢？本文列出了十个值得警惕的信号。需要说明的是，这些点只是某个期刊或出版商不诚实或存在一定问题的潜在指标。一些正规的期刊，特别是在其刚刚创办和推出的时候，可能也会出现类似本文中提到的一点或几点问题。不管怎样，这些警惕信号为您辨别问题期刊或掠夺性期刊提供了有用的参考，至少在您对该期刊进行更充分、更深入的了解之前，希望您慎重考虑是否投稿或引用其发表的论文。 一、无法查到期刊的 ISSN 号信息标准国际连续出版物号（International Standard Serial Number，ISSN）是为各种内容类型和载体类型的连续出版物（例如期刊等）所分配的具有唯一识别性的代码[1