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夜神跃 最近小弟在做喷雾干燥，但是收率较低，用的是雅马拓的喷雾干燥设备，溶剂是乙醇，主药和共聚维酮大概是1比1，浓度是20%。求大神帮忙解决收率问题。初七 这个不好处理：进风、抽风速度、风量、风向、喷液速度等都影响，温度可能也有关系。自己要细细调节处理。answerv5 除了设备实验条件设置的因素，样品前处理也很重要，样品粉末过细的话收率肯定低。另外，雅马拓的喷雾干燥机我用过，旋风分离器老是有死角处粘附的样品无法收集，费了老劲都不 ...

冰之鱼 如题： 肿瘤原发灶肿瘤细胞和转移灶肿瘤细胞的细胞活性是否完全一样？有哪些指标可以评价？另外，体现肿瘤细胞特性的指标有哪些？比如增殖周期什么的。我对这方面了解的少，一时也不知道看什么资料， 请帮忙推荐本书看，谢谢~~冰之鱼 有没有人给回答一下啊？冰之鱼 怎么没人管，没人问啊，自己顶！！！！！！！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

dxm2005128210 求助怎样大批冻存细胞并复苏因为我的实验要一次性冻存10的8次方至9次方数量级的原代提取细胞，可是每个冻存管里细胞数要控制在10的6次方至7次方，也就是一次要冻存十几或二十管细胞。然后要同时复苏这些细胞，在复苏的过程中，细胞管数太多，全部复苏的时间也很长，以至于离心细胞悬液的时候出现大团的絮状物，考虑可能是细胞死亡，细胞内的核酸、蛋白等物质释放出来。那团絮状物吹不散，最后计数仅获得冻存前 ...

amei19872010 紧急咨询请哪位大虾帮我区分一下这几个词肿瘤标记物基因诊断标记物探针标记物woxingwosu 肿瘤标记物：肿瘤细胞产生和释放的某种物质，常以抗原、酶、激素等代谢产物的形式存在于肿瘤细胞内或宿主体液中，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。肿瘤细胞的生物化学性质及其代谢异常，因此在肿瘤病人的体液、排除物及组织中出现质或量上改变的物质，这些就是肿瘤标记物。包括甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA） ...

一心向学hj 各位老师：想请教一下，我在做启动子转录活性方面的研究，做下来的结果是某一启动子位点的突变影响了它的转录活性，如果想继续研究下去，不知道还能从哪方面着手？有什么思路呢？谢谢各位了yuandong 多看文献，文献看到30篇了，你就会有不少想法了。一心向学hj 嗯，我也看了不少了！就是感觉没有什么好的思路！真是郁闷啊！LoftyMan 1. 该promoter有没有被什么protein结合，该promoter是否受该prot ...

ningwang 我在做关于细胞活性氧浓度的测定，来探讨药物对细胞的保护作用。买的是碧云天生成的活性氧检测试剂盒，但是不知道胞内的荧光用什么仪器可以检测得到，望各位指导。伽利略 流式细胞仪实际上这些问题你可以发信直接问试剂公司。哈啰 激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪都可以的，试剂盒里说明书上有写的，个人觉得流式细胞仪比较好些本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

nulidaodi 加通路的抑制剂前需要检测这个抑制剂对细胞活性的影响吗？从道理上来说应该检测吧！但是很多文献都没有检测,特别是很多抑制剂都是用DMSO溶解的，如何解释，请高手指点，多谢！！pengwu46 一般用DMSO做一个空白对照就可以了，说明DMSO对细胞生长，信号的传导都不影响。如果用通路抑制剂，理论上确实需要检测该抑制剂对其他通路的影响和对细胞生长的影响。一个必须考虑的问题是，通路抑制剂一般特异性都比较低， ...

vondolf 麻烦大家了！iscience 细胞内钙离子浓度很低，约为10-7mol/L,而细胞外钙离子浓度要高4个数量级，约为10-3mol/L，内外相差1000~10000倍。因此，当一种刺激能使细胞外有少量的钙离子进入细胞内时，就会使细胞质钙离子浓度大幅度增加，继而使与某些蛋白质或酶结合使其激活，引起生理反应，实现对细胞功能的调节。钙离子的细胞生物学功能在很大程度上是建立在细胞内、外钙离子的不平衡分布上，细胞质中的 ...

qinna767 系膜细胞中活性氧对一氧化氮的影响有种这方面的同志不？目前的文献有氧化应激下NO升高，也有活性氧升高，NO生物利用度降低，eNOS解耦联产生活性氧，NO降低的为什么会有矛盾的报道有人做这方面的研究不？大家交流一下新手上路，欢迎指教苏叶 我们目前做的类似实验验证了你的后一个观点，氧化应激引起eNOS脱偶联，NO生物利用度降低，同时也观察到NO产量降低，因为超氧阴离子消耗了NO，阻碍了其生理功能。不过在炎 ...

janetlee1976 我们的实验拟鉴定高盐（氯化钠刺）激后，细胞某些基因表达水平的变化。但我们按文献分别选择了50、100、125、200、500mM浓度的NaCl进行刺激（HEK293）细胞，时间分别为30min、2h、12h、24h，结果最低50mM刺激30min后，大部分细胞都漂了，不知道该怎么办了？另外，如刺激30min，对基因的表达水平会有影响吗？谢了！freecell refer to:http://www.scien ...

hyjiangshunzhi 准备做NF-kB的活性检测，不知道那位高手有详细的EMSA实验方法，谢谢！细胞因子 这里有一篇与NF-kB相关的研究文献，里面用到了EMSA方法，并有具体论述，可以参考。cww_dream 美国Signosis NF-kB filter assay，比凝胶迁移试验简单、快速 ，多个样品可在一个试验中得到分析，与基于ELISA的转录因子检测方法相比花费更少 ，二个或以上样本可同时定量分析，希望对你有用版主docto ...

licanming 我的实验是用VEGF处理细胞后测定细胞PKC激活水平，拟采用Western blot的方法，用ECL法检测，这样分析PKC激活程度结果国际上认可吗?我在Cell Signaling Technology上，查到2261 Phospho-(Ser) PKC Substrate Antibody W IP E D9371 Phospho-PKC (pan) (betaII Ser660) Antibody W IP9921 Phospho-PKC Antibody Sampler K ...

wyp504 看到有文献报道预测出来了miRNA前体序列，想设计探针检测成熟序列，但不知针对70多nt的哪一段合成探针？有没有什么办法能够预测成熟miRNA序列？谢谢！freecell see paper :http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/full/33/11/3570Hope it helps.nature2010 不知lz是做northern还是pcr？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有 ...

leexuanhao 诸位好，小弟在做药物对癌细胞株的影响，病探讨机制，预实验结果显示，药物对细胞株的增殖是有抑制作用的，进一步探讨抑制机制，选取STAT3，应该ELISA法检测磷酸化水平，之前看过很多文献，知道STAT3是个癌基因，预期结果应该降低P-STAT3的水平，但是结果显示其水平增高，不知道如何解释啊。本人不是分子生物学专业的，平时只能是在临床工作中抽时间看看文献，但现在真是想不明白，请专业的大侠予以指点！万 ...

dcz200210021 想向大虾们请教几个问题,现在抑制NF-κB活性的方法有哪些种？ 都各有什么优缺点。有没有些关于这方面的文章可以介绍给我看看。不甚感谢！doctormy 常见的方法有：1、RNAi（NF-κB p65 siRNA）：优点特异性较强、缺点价格较高2、针对NF-kB亚基设计的反义寡核苷酸（如NF-κB p65反义寡核苷酸）：优点，靶点明确；缺点，抑制效率不如RNAi3、转染IkB-a突变体阻断NF-kB活化：优点，靶点明确；缺点 ...

adria 　　试剂盒才买回来，是upstate的那个，rho activation assay kit研读说明书中，我以前从没做过pull down assay的，同实验室也没师兄师姐做过...所以，基本等于小白一个　　问题是这样的，在rho pull down assay的这个步骤中，最后要求短暂离心收集管底物质。在免疫分析这一步又要求讲上清和琼脂糖珠混合，把我弄糊涂了，那前一步收集的管底物质是干什么的？　　试剂盒很贵，实在不敢浪费，请大人们指教了~附上说明书 ...

dreamwaking 我有一个药物，用MTT测线粒体活性，在一个小时的时候生成的甲臜量大量增加，而且具有随着浓度的增加，MTT也变大。随着时间增加（12小时左右），高浓度的细胞开始死亡。整个过程测了自由基并没有增加，线粒体膜电位也没有显著减少。不知道怎么去解释这个问题。困扰很长时间了。lwjssry 应该是你的药物的问题，你的药物是什么？估计是一种还原剂吧。你要理解MTT的作用原理，MTT是被线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原 ...

alieenlee 我现在做P2Y2受体在癌细胞上的表达，之前PCR出来过很清楚的条带，但是最近细胞状态很不好，硬着头皮加药做了几批，反转录后死活P不出来了，但是actin 一直都不错。想来想去也想不出原因，猜测是因为细胞状态不好导致了这个基因不表达。请问高手们，你们是否碰见过这种现象？这种猜测有道理吗？lwjssry 状态不同时蛋白表达谱是不同的，所以细胞状态非常重要nulidaodi 细胞状态对蛋白的表达非常重要，所以一 ...

llyun2000 我现在要做nf-kappaＢ的活性，请问，western检测细胞核中的p６５，需内参吗？lwjssry 用组蛋白 H1、H2等wangp249 Lamin A/CLamin Bhbqh 用β-actin可以吗 还想问用什么方法提细胞核啊？amygdala actin是典型的胞质内参，不能用来做核内参。一般用来做核内参的是组蛋白H1、H2等，或者是laminin。组蛋白的分子量一般较小，可根据需要选择。另外，如果要检验质核分离的效果 ...

ddm_anny 各位大虾们，我最近在做一个基因启动子的活性检测，用的是promega 公司的试剂盒，构建了几个5’逐渐缺失的报告基因，做转染的时候用的是跨物种的T98G cell line, 选择peGFP来估计转染效率，同时用PGL-3-Control和PGL-3-Basic来估计整个测量系统，结果显示转染效率还是可以，主要是PGL-3-Control组的荧光素酶活性值达到25万，同时PGL-3-Basic组的读数还不到100，也就 ...