用途
适用范围： 靶向眼内组织，特别是视网膜。
材料与仪器
病毒与工具： 准备好稀释的 AAV 病毒液、Hamilton微量注射器 (推荐 33-34G 针头) 及手术显微镜。
注射剂量： 标准注射体积为 1–2 µL，单眼剂量通常为 1×10⁹ – 5×10¹⁰ vg。
眼部准备：将小鼠麻醉并置于加热垫上，滴入局部麻醉眼药水，滴入散瞳剂，并等待 5-10 分钟，直至瞳孔完全散大。此步骤对于术中观察针尖位置至关重要。
步骤
1.病毒注射
在显微镜下，用精细镊子轻柔地固定眼球。
找到注射点：角膜缘后方约 2mm 处，眼球上方（11-12 点钟位置）。
星形标记表示 AAV 的注射位置，方形标记表示角膜穿刺位置。
图片来源：Methods Mol Biol. 2023;2708:155-174. doi: 10.1007/978-1-0716-3409-7_17.
进针角度与深度：将针头（斜面朝上）以 45°角向眼球后方刺入，此角度旨在避开晶状体。
缓慢推进针头，直至能通过散大的瞳孔清晰地看到针尖进入了玻璃体腔。
注射：以极慢的速度（如 0.1 µL/秒）注入 1-2 µL 病毒液。
注射完成后，务必在原位静置 30 秒，以使病毒充分扩散，最大限度减少回流。
拔针：缓慢、平稳地拔出针头。为进一步降低眼压、防止回流，可在拔针前用另一根针头在角膜处进行穿刺，释放少量房水。
2.术后护理
在注射后的眼睛上涂抹抗生素眼膏或润滑凝胶。
将小鼠放置在 37°C 的恒温箱中恢复，并建议单笼饲养，直至完全清醒，以防眼部被同伴伤害。
来源：丁香实验
