T 细胞培养操作流程（在 24 孔 G-rex 容器中扩增 T 细胞的方案）

第 0 天：T 细胞培养和活化

1. 使用前将足够体积的 PRIME-XV T Cell CDM 预热至 37˚C 至少 15 分钟。注：为避免温度循环，请在预热前确定所需的总体积。
2. 将冻存管在 37˚C 水浴中轻轻搅拌解冻 1 分钟。或者使用新分离或收获的细胞。
3. 小心地将冻存管中的细胞全部转移到装有 10 mL PRIME-XV T Cell CDM 的 15 mL 锥形管中。
4. 将细胞以 300 g 离心 5 分钟。
5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的最小体积培养基。
6. 在适当体积的 PRIME-XV T Cell CDM 中加入 200 IU/mL IL-2。
7. 7. 以 1 x10⁶ PBMCs/well（0.5x10⁶ cells/cm²）接种至 7 mL 完全培养基中。

1. 加入 1 μg/mL 人源 CD3/CD28 抗体。
2. 在 37˚C 和 5% CO₂下培养细胞。

第 3 天：继续刺激

1. 每孔再补充 200 IU/mL IL-2。

第 5 天：更换培养基

1. 用移液管从孔的上边缘慢慢向下移取 5.25 mL 用过的培养基，小心避免意外吸入细胞。
2. 轻轻旋转或重悬剩余液体，使细胞均匀分散，以便进行细胞计数。
3. 加入 5.5 mL 补充有 200 IU/mL IL-2 的新鲜培养基。

第 7 天：继续刺激

1. 每孔再补充 200 IU/mL IL-2。

第 10 天：更换培养基

1. 用移液管从孔的上边缘慢慢向下移取 5.25 mL 用过的培养基，小心避免意外吸入细胞。
2. 轻轻旋转或重悬剩余液体，使细胞均匀分散，以便进行细胞计数。
3. 加入 5.5 mL 补充有 200 IU/mL IL-2 的新鲜培养基。

第 12 天：继续刺激

1. 每孔再补充 200 IU/mL IL-2。

第 14 天：收获细胞

1. 用移液管从孔的上边缘慢慢向下移取 5.25 mL 用过的培养基，小心避免意外吸入细胞。
2. 轻轻旋转或重悬剩余液体，使细胞均匀分散，以便进行细胞计数。
3. 收获剩余体积中的细胞。