外泌体纯化和分析之聚合物沉淀

沉淀技术在半个世纪前就应用于富集和提纯病毒颗粒，而 EVs 和病毒颗粒有相近的生物理化特性，因此此方法根据溶解度将 EVs 与其它化合物分离。

最常用的亲水多聚物沉淀法是 PEG 沉淀法，PEG 亲水性强，有较广范围的分子量，优良的适应性和富集功能使其成为目前商品化EVs富集试剂开发的热点。

富集外泌体

【样本制备】

一、血浆样本的制备

1. 静脉采血（尽量用大针头，减少对血液细胞的破坏，污染外泌体），废弃最初的1-2ml血液；

2. 用柠檬酸盐抗凝管收集血液；建议用医用EDTA抗凝管收集，并轻柔充分混匀（30min内做后续处理样本）

3. 800×g离心10min，去除红细胞和白细胞；

4. 收集血清，2500×g离心10min，充分去除血浆中的杂质和细胞碎片等；（建议取血浆）

5. 收集血清（主要含血浆和血小板），-80℃保存；（收集血浆）

6. 干冰运输。

二、尿液样本的制备（以50ml收集管为例）

1. 在50ml尿液收集管中加入0.4ml 2%的硫柳汞抑菌剂，收集中间尿≥40ml（中间尿含细胞和蛋白较少），此时硫柳汞达到工作浓度0.02%；（比例1:100或1:200 2%硫柳汞）

2. 尿液保存于-80℃，干冰运输。

三、细胞培养上清的制备：

1. 细胞常规培养，当细胞密度达到约70%后，进行换液，换液时培养基更换为无外泌体的FBS完全培养基（根据实验要求确定FBS含量）。培养24h后，收集培养上清；

2. 于超净台中将细胞培养上清液样本分装于15mL的离心管中，配平后室温、300×g离心10min，收集上清液（去除死细胞和大的细胞碎片）；

3. 收集的上清液分装于15ml的离心管中，配平后室温、2000×g离心10min，收集上清液（去除较大的颗粒）；2500g

4. 上清储存于-80℃，干冰运输。

1、需要对样本进行严格的前处理，以减少杂质污染

1、可能有较多杂质蛋白以及其它非EV成分的污染；

2、由于杂质含量高，不推荐用于后续的测序及组学分析；