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        采用多肽结合竞争抑制实验测定目标多肽与MHCI类分子结合的相对亲和力

        相关实验:Th细胞表位的鉴定

        最新修订时间:

        材料与仪器

        试剂:

        ① 荧光素或 125I 等标记的、能与相应 MHC II 类分子高亲和力结合的已知 Th 细胞表位多肽,作为参考多肽;目标多肽;

        ② 5~500 nmol/L MHC II 类分子;

        ③ 蛋白酶抑制剂。

        步骤

        肽结合抑制实验测定多肽亲和力方法的基本流程如下:

        (1)合成、制备荧光素或 125I 等标记的、能与相应 MHC II 类分子高亲和力结合的已知 Th 细胞表位多肽。

        (2)在有蛋白酶抑制剂存在的条件下,将目标多肽和 5~500 nmol/L MHC II 类分子、1~10 nmol/L 标记后 Th 细胞表位多肽一起室温孵育 48 小时。过凝胶柱,分离获得 MHC II 类分子-多肽复合物。

        (3)测定 MHCII 类分子-多肽复合物的荧光发射、计数 MHCII 类分子-多肽复合物的 γ 射线 cpm 等,计算抑制率,采用 ICso 代表目标多肽与 MHC II 类分子结合的相对亲和力。

        来源:丁香实验

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