简介
原理
琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡的基本原理是凋亡出现时，细胞内源性的核酸内切酶被激活，将染色质 DNA 自核小体间降解，形成相差 180～200 bp的大小不等的寡核苷酸片段。
提取凋亡组织或细胞的 DNA，经琼脂糖凝胶电泳，分离不同长度的 DNA 片段，再经 EB 染色，紫外灯下观察，可见特征性的梯状条带（ladder）。
材料与仪器
器材：
① 500 mL 的锥形瓶
② 1.5 mL Eppendorf 管
③ 移液器吸头
④ 10 mL 吸管
⑤ 吸管橡皮球
⑥ 水浴箱
⑦ 微波炉
⑧ 离心机
⑨ 电泳仪
⑩ 电泳槽
⑪ 紫外灯
⑫ 微量移液器
⑬ HeLa 细胞（或别的细胞）。
试剂：
① 凋亡诱导剂（根据情况自定）
② 消化液（0.02％ EDTA）
③ PBS
④ 裂解液
（NaCl（100 mmol/L，pH8.0），Tris-Cl（10 mmol/L），EDTA（25 mmol/L，pH8.0)，SDS（5 g/L））
⑤ 蛋白酶 K（20 mg/mL）
⑥ RNA 酶（10 mg/mL）
⑦ 苯酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）
⑧ 3 mol/L 乙酸钠（pH5.2）
⑨ 100％ 乙醇
⑩ 70％ 乙醇
⑪ TE 缓冲液
⑫ 电泳缓冲液（TAE）
⑬ 琼脂糖
⑭ EB（10 mg/mL）
⑮ 6 x 上样缓冲液
步骤
琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡的基本过程可分为如下几步：
A 将 5 x 106 个已诱导凋亡的细胞收集至 1.5 mL Eppendorf 管中，600 r/min 离心 5 min，弃上清液。
B 冷 PBS（4 ℃）重悬细胞，1000 r/min 离心，弃上清液。
C 加入 497.5 μL 裂解液、2.5 μL 蛋白酶 K，重悬细胞。56 ℃ 水浴 3 h（或 37 ℃ 过夜），期间轻摇几次。
D 加入等体积的苯酚-氯仿-异戊醇（500 μL），轻播 5 min，20000 r/min 离心 5 min，将水相移至一新 1.5 mL Eppendorf 管中。重复抽提一次。
E 加入 1/10 体积的乙酸钠（3 mol/L），2.5 倍体积的 100％ 乙醇，上下颠倒、混匀，冰浴 10～15 min。20000 r/min 离心 10 min 沉淀DNA，弃上清。
F 70％ 乙醇洗涤，晾干或真空抽干。
G 加入 TE 缓冲液 30～50 μL、RNA 酶 5 μL，37 ℃ 水浴 30～60 min［可重复步骤（4）～（6），以去除 RNA 酶］。
注意事项
1 苯酚有强腐蚀性，能引起烧伤。氯仿有致癌作用，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激性。所以苯酚-氯仿-异戊醇相关的操作应戴手套、穿白大衣，在化学通风橱内操作。其废弃物应有专门的容器。
来源：丁香实验
