• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        IGS 间接法

        最新修订时间:

        原理

        免疫金染色(immunogold staining,IGS)法是由 Geoghegan 等(1978)首次应用金标探针检测 B 淋巴细胞表面抗原,将胶体金颗粒(大于 20 nm)标记在第二抗体或 SPA 分子上,制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后,用金标二抗或金标 SPA 与特异性抗体结合,形成抗原-抗体-金标抗体复合物,此时在光镜(10 × 100 倍)下可见红色颗粒物,即为抗原-抗体结合物。该方法特点简便、快速(因不需银显影),要求金标抗体浓度高,而且金颗粒直径大于 20 nm

        材料与仪器

        步骤

        1. 4 μm 石蜡切片常规脱蜡至水,0.05 mol/L(pH 7.4)TBS 洗 2 × 3 min。


        2. 1% 卵蛋白 [EA,用 0.05 mol/L(pH 7.4)TBS 稀释] 温育 15 min,不洗。


        3. 加入适当稀释特异性抗体,37℃ 温育 1 h,0.05 mol/L(pH 7.4)TBS 洗 2 × 3 min。


        4. 0.02 mol/L(pH 7.4)TBS(内含 0~1% BSA)洗 10 min。


        5. 1% 卵蛋白温育 15 min,不洗。


        6. 适当稀释的金标记 SPA 30 nm(PAG 30 nm)室温孵育 1~2 h,0.05 mol/L(pH 7.4)TBS 洗 3 × 3 min。


        7. 双重蒸馏水洗 5 min,1% 戊二醛洗 10 min,双重蒸馏水洗 5 min。


        8. 用 0.01% 伊文斯蓝衬染 3 min,50% 缓冲甘油封片。


        9. 结果观察:阳性呈现红色细颗粒状。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序