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        CIGSS 法

        最新修订时间:

        原理

        彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)是由 Frite 和 Hoenes 等(1986)建立的一种新方法,刘彦仿等1988)在《中华病理学杂志》上也报道了改进后的 CIGSS 方法。其基本原理是在 IGSS 法的基础上,根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的,即 IGSS 后,在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应,将银颗粒氧化成溴化银,后者与彩色显影剂起还原反应,生成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产物使彩色成色剂由无色变成有色的染料,并沉积在银颗粒的部位,金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位,不会发生非特异性背景染色。

        材料与仪器

        步骤

        1. 石蜡切片常规脱蜡至水。


        2. 0.1% 胰蛋白酶 37℃ 消化 20 min,或抗原修复 20 min(98℃),自然冷却至室温。


        3. 0.05 mol/L(pH 7.4)TBS 洗 3 × 3 min。


        4. 1%EA(卵蛋白)15 min,不洗。


        5. 适当稀释的特异抗体室温 4 h 或 4℃ 孵育 20 h,或 37℃ 孵育 1 h。


        6. 0.05 mol/L(pH 7.4)TBS 洗 3 × 5 min。


        7. 0.02 mol/L(pH 7.4)TBS(内含 0.1% BSA)洗 10 min。


        8. 1% EA 15 min,不洗,1:10~1:20 稀释的 PAG 10 nm 室温孵育 1 h,或 37℃ 孵育 30 min。


        9. 0.05 mol/L(pH 7.4)TBS 洗 10 min。


        10. 1% 戊二醛洗 10 min。


        11. 双蒸水洗 5 min。


        12. 1% 明胶洗 5 min。


        13. 银避光显影(见银显影剂配方)8~15 min。


        14. 双蒸水洗 15 min。


        15. 固定:用显影定影液(1:4 或 1:10)固定 5 min,也可以用 15% 硫酸钠-20% 硫代硫酸钠混合液固定 1~3 min,或用 1% 戊二醛固定 5 min,温水洗 3~6 min。


        16. 漂白:用 2% 铁氰化钾和 1% 溴化钾洗 10 min,双重蒸馏水洗 5 min。


        17. 彩色显影:用萘酚或菲尼酮或碱性品红显色 2~4 min,双重蒸馏水洗 5~10 min。


        18. 固定:2% 硫代硫酸钠和亚硫酸钠洗 5 min。


        19. 流水冲洗。


        20. 缓冲甘油封片,观察。

        常见问题

        CIGSS 的优点:


        1. 阳性结果比黑色更鲜明。


        2. 可以使弱信号得到进一步放大。


        3. 可部分消除 IGSS 背景染色。


        4. 信号/背景比值高。


        5. 是开展 IHC 双重或多重标记的新途径。

        来源:丁香实验

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