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        SPA 纯品

        相关实验:SPA 各种免疫检测试剂制备实验

        最新修订时间:

        原理

        SPA 纯品系由含 A 蛋白的 Cowan I 株金黄色葡萄球菌中纯化获得。其制备过程除细菌培养外,主要有提取和纯化这两个工艺组成。提取方法多种,其中溶葡萄球菌素与亲和色谱组合方法最有效。现介绍如下。

        材料与仪器

        步骤

        1. 用 0.05 mol/L(pH 7.5)的 Tris · HCl 洗下菌苔,每 100 g 湿菌加溶葡萄球菌素 5 mg,调节 pH 值到 3.5,离心后取上清,并将 pH 值调到 7.0。


        2. 用饱和硫酸铵沉淀,溶解透析,透析物用 DEAE-Sephadex A50 纯化,以 0.1 mol/L 碳酸氢铵(NH4HCO3)平衡后上样,再平衡过夜。


        3. 用 0.4 mol/L NH4HCO3 洗脱(流速 1.5 ml/min),样品测定 A275 nm 和活性,将含活件者合并、浓缩、冻干保存于 -40℃ 中。


        4. 上述纯化获得的 SPA 可进一步用 IgG-Sepharose 4B 亲和层析柱过滤,进一步纯化 SPA。


        5. 纯度鉴定用 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶为分离系统进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,样品浓度为 1 mg/ml,加样量为 40 μl。电泳结果应显示一条明显条带。


        来源:丁香实验

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