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- 阿拉丁
- 上海
- S377729
- 2026年01月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温
- 英文名：
Sephadex Stripping/Regeneration Buffer
- 库存：
现货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
S377729-1L
英文名：Sephadex Stripping/Regeneration Buffer
纯度或规格：0
SPU：S377729
CAS：-
存储温度：室温
运输条件：常规运输
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文献和实验。 ( 2 ) 尿素和硫脲的溶解约需 30 min。绝对禁止用加热的方法促进缓冲液溶解。可以用超纯水（18.2 MΩ cm 电阻率）配制缓冲液。 ( 3 ) 应先配制 20% Triton X-100 溶液，保存在 4°C 备用。 ( 4 ) 根据等电聚焦步骤中选择的 IPG 胶条的 pH 梯度，选择合适的 IPG 缓冲液。 ( 5 ) 虽然此方案只有一次重复取样，但通常每个样品能够提取 3 次蛋白质，所有提取蛋白量能够进行 5 次双向电泳。 ( 6 ) 在离心之前离心机温度降到 0°C
用EDTA将柱脱镍再生了。 镍柱在上样后的缓冲液淋洗阶段，峰往往很拖尾，要耐得住性子，让它淋洗完全。 此柱的融合蛋白载量大约为20mg/ml。不同的镍柱，不同的蛋白，载量也是不同的。 经过一步Chelating Sepharose FF纯化，融合蛋白的SDS-PAGE纯度大约为90%。 （3）Sephadex G-25（fine）换液 pH8.0，20mM PB做缓冲液置换。更换Chelating柱洗脱融合蛋白的溶液体系，使得适合肠激酶酶切的要求。 点评：Sephadex G-25
蛋白洗脱下来，但是洗脱峰很拖尾，纯度虽然好一些，可收样体积要大许多，收率也略低。 250mM咪唑洗脱杂蛋白不是此工艺中的要点。实际上，我们在操作过程中往往没有此步骤，就直接用EDTA将柱脱镍再生了。 镍柱在上样后的缓冲液淋洗阶段，峰往往很拖尾，要耐得住性子，让它淋洗完全。 此柱的融合蛋白载量大约为20mg/ml。不同的镍柱，不同的蛋白，载量也是不同的。 经过一步Chelating Sepharose FF纯化，融合蛋白的SDS-PAGE纯度大约为90%。（3）Sephadex G-25
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