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        糖原染色

        相关实验:糖类染色实验

        最新修订时间:

        原理

        糖原由多糖衍化而来,是单纯的多糖。糖原易溶于水,所以用特殊的 Carnoy 固定液或无水乙醇直接固定才能较好地保存糖原,常用高碘酸(periodic acid)-Shiff 反应(PAS)染色法。

        材料与仪器

        步骤

        高碘酸氧化液:高碘酸 0.5 g,蒸馏水 100 ml。此液溶解后放入冰箱中待用。


        Schiff 染色液:碱性复红 1 g,1mol/L 盐酸 20 ml,焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)2 g,双重蒸馏水 200 ml。先将 200 ml 双重蒸馏水煮沸,稍有火焰,加入 1 g 碱性复红,再煮沸 1 min,冷却至 50℃ 加入 20 ml1mol/L 盐酸,待 35℃ 时加入 2 g 焦亚硫酸钠。室温中 2 h 之后见稍带红色,5 h 之后变为无色液体。棕色瓶内装好,放入冰箱中保存待用。


        1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。


        2. 蒸馏水洗 2 次。


        3. 高碘酸氧化液处理 10~20 min。


        4. 充分蒸馏水洗。


        5. Shciff 液染色,染色 10~20 min(如果室温在 15℃ 以下时,可在湿盒内加入温水而加快反应)。


        6. 流水冲洗 3 min(对于着色较深的切片可适当缩短时间)。


        7. 用 Mayer 明矾-苏木精液染细胞核 3~5 min。


        8. 0.5% 盐酸乙醇液分化 30s,自来水浸洗 2 min。


        9. 无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

        注意事项

        1. 糖原固定必须及时取小块组织进行固定,防止固定不透或不均现象。


        2. Schiff 试剂使用时的吸管要清洁,当室温较低需加热时,要注意染色不能较深,防止影响染色效果。

        常见问题

        结果:糖原物质呈红色,细胞核呈蓝色。

        来源:丁香实验

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