• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        LSAB 法

        相关实验:亲和免疫组织化学实验

        最新修订时间:

        原理

        LSAB 法或称 S-P 法、SABC 法,它是采用生物素标记的第二抗体与结合有 HRP 或 AKP 酶的链霉亲和素(streptavidin)连接来测定细胞及组织中的抗原。链霉亲和素是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质,相对分子质量 60000,不含糖链,等电点 pI 为 6.0~6.5。链霉亲和素同一定浓度的生物素化酶混合后,就能形成链霉亲和素-酶复合物,这种复合物中至少存在 1 个尚未被生物素占据的亲和素结合位点,可以和各种生物素标记抗体结合。由于采用了改良的亲和纯化技术和酶标技术,LSAB 法敏感性更髙、背景更清晰,其原理见图 5-3。

        材料与仪器

        步骤

        1. 石蜡切片常规脱蜡至水,PBS 洗 3×3 min。


        2. IHC 的前处理视特异性一抗不同,可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复(AR),PBS 洗 3×3 min。


        3. 3% 过氧化氢孵育 10 min(可省略),以阻断内源性过氧化物酶活性。


        4. PBS 洗 3×3 min。


        5. 10% 非免疫性动物血清孵育 10 min(可省略),以减少非特异性背景,无需冲洗,只需吸去多余血清。


        6. 滴加适当稀释的第一抗体,37℃ 孵育 60 min 或 4℃ 过夜。


        7. PBS 洗 3×3 min。


        8. 滴加生物素标记的二抗,37℃ 孵育 30~60 min。


        9. PBS 洗 3×3 min。


        10. 滴加过氧化物酶标记的链霉亲和素,室温孵育 30 min。


        11. PBS 洗 3×3 min。


        12. 0.04% DAB(含 0.03% H2O2)显色 5~10 min。


        13. 复染,脱水,常规树胶封固,结果观察。

        常见问题

        此方法与 ABC 法相比,不需 A、B 两液提前混合,操作者容易掌握,稳定性高,由于采用了低等电点的链霉亲和素,其内源性生物素干扰要低于 ABC 法。目前该法仍将是诊断和研究的常用方法,有现成的即用型 S-P 试剂盒出售,种类很多,还有针对一抗是羊、鸡、大鼠、小鼠和兔的试剂盒。该法生物素化二抗和链霉亲和素-HRP(AKP)的孵育(室温)时间仅需 10~15 min,其敏感性和所用时间与 EnVision 法一致。其最大的缺点是内源性生物素的干扰。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序