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        拭子标本中病毒 DNA 的提取

        相关实验:病毒 DNA 的提取实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        预操作:将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中,洗下标本。若标本在 4 h 内处理,可置于室温保存,否则需 4℃保存。


        1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min, 沉淀细胞。


        2. 吸去上清液,若有血液残留,可1 ml TE 缓冲液悬浮细胞,移至Ep管中,重复离心1次。


        3. 去上清液,如仍有血液残留,可重复第 2 步,直至沉淀物中无红细胞痕迹为止。


        4. 用 50~300µ1 裂解液悬浮细胞,使细胞达到 10~1000 个/µl 。


        5. 用 55℃,1 h 消化裂解细胞,释放 DNA, 然后 95℃ ,10 min 灭活蛋白酶 K 。


        6. 10000 r/min 离心 5 min, 取上清液做 DNA 模板。



        常见问题

        1. TE 缓冲液由 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0) 和 1 mmol/L EDTA 组成。


        2. 裂解液由 50 mmol/L KCl、10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.3)、2.5 mmol/L MgCl2、100 µg/ml 蛋白酶 K 、1% Laureth-12 和 0.5%Tween-20 组成。

        来源:丁香实验

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