备择方案 用电泳分离的抗原进行免疫

1. 将含 10～50 μg 目的蛋白抗原的蛋白质混合物上样于适当的 SDS 变性分离胶并电泳。

2. 将胶浸泡在冷的 0.1 mol/L 的 KCl 中 5～15 min。蛋白质条带会在透明凝胶的背景下出现白色沉淀。用解剖刀或剃须刀切下合适的条带。

3. 在组织研磨机中用最小量的 PBS 研磨凝胶条带。确定连续加入 100 μl 直至研碎的凝胶条带成为液体所需的最小体积。

4. 用包含 10～25μl 抗原的凝胶悬液 200～400 μl 腹腔注射免疫小鼠。

5. 3 周后用包含 10～25μl 抗原的凝胶悬液 200～400μl 腹腔注射强化免疫小鼠。

6. 采血，测定抗体滴度，进行细胞融合试验（见基本方案步骤 4～8）。