• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        基本方案 制备免疫脾细胞:用可溶性抗原致敏

        相关实验:小鼠免疫实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 准备等体积 PBS 含 25~100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液(200~400 μl/鼠)。用双头带塞的连接器连接两个注射器,一个注射器装抗原,另一个装佐剂。来回推压注射器,使得其内容物从一侧到另一侧注射器,推压 5~10 min 直到得到稳定的乳化液。


        2. 用 22-G 的针给小鼠腹腔注射(每一个抗原 3~5 只小鼠)。


        3. 3 周后,用等体积的含 10~50 μg 抗原的 PBS 和不完全弗氏佐剂配制成(200~400 μl)的乳化液再次腹腔注射。


        4. 第二次免疫后 7 天,用无菌剪刀或剃毛刀片切掉小鼠尾巴 0.5 cm 采血。收集 100~200 μl 血装于 1.5 ml 的微量离心管。将小鼠放在产热灯下 30~60 s 保暖或用拇指和食指挤压尾巴可以方便采血。


        5. 血块形成后,用木制涂棒把血块从管和表面移走,不要弄破血块。移走血块后,用 200μl 的移液器把血清装入另一微量离心管。经 ELISA 确定血清抗体滴度。如有需要,用免疫印迹,进一步对抗体定性。


        6. 如果滴度太低不能用于融合(≥1/1000),每两周给小鼠加强免疫直至达到足够的应答。如果采血超过 3 次,用剃毛刀切开一侧尾静脉采血。


        7. 当抗体滴度足够高时(≥1/1000),融合前 3 天,但要在前一次免疫的 2 周后,用含 10~50 μg 抗原的 PBS 溶液腹腔注射(200~400μl)或经皮下尾静脉(50~100μl)注射加强免疫。


        8. 在强化免疫的 3 天后进行细胞融合。

        注意事项

        处理弗氏佐剂要小心,因为自注射会产生阳性的 TB 试验,导致肉芽肿样反应。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序