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    技术和方案2 快速粗放的酵母菌落质粒转化法

    相关实验：酵母遗传学方法实验

    最新修订时间：

    材料与仪器

    步骤

    程序 该方法根据Chen等 （1992)修改而来。 1 ) 用新鲜的2mol/L 乙酸锂母液现配成以下转化混合液： 200|iJ 无 菌 2mol/L 乙酸锂 800jlJ 无菌 50% PEG-3350 7. 7/^1/?-巯基乙醇 2 ) 力 lU jullO rng/m l的变性鲑鱼精子D N A 至 1.5m l无菌离心管中，其中，已含有ljug 质粒DNA (标准微量制备得到的5jal D N A 就足够）和 100^1转化混合液，振荡 混匀。 3 ) 从一块新鲜的划线平板上挑取一个较大的酵母单菌落到以上加有D N A 的转化混合 溶液中并振荡均匀。另外做一个不含D N A 的阴性对照转化。 4 ) 在 37°C摇床孵育30mm。 5) 3000r/m in离 心 5m in，弃上清，将细胞重悬于lOOjul无菌水，并涂布于选择平板。 材料和溶液 转化混合液 50% 聚 乙 二 醇 （ PEG) (MW 3350; SigmaP3640) 一个月以内配制的2mol/L 乙 酸 锂 （ 最好是新鲜配制的） 〉 98%/?■疏基乙醇（ 〜17mol/L); SigmaM7154 载 体 DNA (lCVg/iul鲑鱼或青鱼精子DNA) 注意： 来源于新鲜平板的细胞转化效率非常高；在平板上培养了几个月的老细胞也 可以用于转化，但是效率较低。

    来源：丁香实验

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