相关实验：蛋白质复合体性质的研究
最新修订时间：2024-05-13
材料与仪器
步骤
来源：丁香实验
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问
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大分子蛋白总转不出来，该如何调节电泳条件?
想用一个短肽（5肽）做配基亲和纯化一个可以无他特异性结合的蛋白，用什么做调料比较好？
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![⑤ 小分子与B S A 偶联的适宜方法决定于小分子的功能团。 由于篇幅的限制，这里不能逐一介绍每种可能出现状况的处理方法。 关于生物相关的化学方面的介绍，可 查 阅 Hermanson (1996)。下面介绍 的方法只作为一般性指导。具体实验细节依据研究对象的性质。 若需连接在小分子的C 末端，贝 IJ: a. 在基本条件下，采用 N ，] NT-二琥珀酰亚胺碳酸盐作为一种N -羟基 琥珀酰亚胺酯，以活化C 末端。 b•在PBS (pH7. 5 ) 中，将 活 化 的 复 合 体 与 B S A 相 混 合 ，室温孵 育 lh 。 小分子与B S A 的混合比例取决于复合体，但在开始的时候可以采用 10 : 1 (摩尔比），加人过量的小分子。 c. 用凝胶过滤将连接产物和复合体分离。 若需连接在小分子的N 末端，则 ： a. 用 至 少 1 0 倍物质的量的D S G 活化小分子。 b•将未反应的D S G 和复合体二聚体与活化的复合体分开。 c. 在 P B S (p H 7. 5 ) 中，将 活 化 的 复 合 体 与 B S A 混 合 ，室温孵 育 l h 。 小分子与B S A 适宜的混合比例取决于复合体，但在开始的时候可以 采 用 10 : 1 (摩尔比），加入过量的小分子。](http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/07/A1469434957562tcqqemdt9wpng_small.jpg)
