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        方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验

        相关实验:细胞和亚细胞提取物的制备实验

        最新修订时间:

        原理

        利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。为了检测诱导和重组蛋白的表达水平,评估方法的快速简单是很重要的。本方案使用 0.5% TritonX-1OO 裂解细胞,小量制备细菌提取物。

        材料与仪器

        步骤

        1.室温离心 1min,从 1ml 培养物中收集细菌。

        2.去除上清,用 1ml 预冷的 0.5%(体积分数)TritonX-100 重悬细菌细胞的沉淀物。

        3.超声波处理悬浮液,3 个循环,每次 20s。超声间隙把细胞放在冰上冷却。

        4.将悬浮液在小型离心机中离心 lmin。

        5.在上清液中加入 Lammli 样品缓冲液(含有 100 mmol/L DTT)。混合物煮沸 2 min,用分析级 SDS-PAGE 分析目的蛋白(见方案 1)

        来源:丁香实验

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