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        Omega质粒小量提取流程

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        7813
        一、实验试剂

        1. 使用前,将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。

        2. 按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer,并于室温保存。

        D6948-00B: 加入8 ml无水乙醇。

        D6948-01B: 加入80 ml无水乙醇。

        D6848-02B: 加入80 ml无水乙醇。

        二、实验步骤

        1. 取1.5-5 ml 菌液10 000 x g室温离心1min收集菌体沉淀;

        2. 小心去除上清液,加250 ul Solution I/RNase,涡旋或用移液枪上下吹打重悬菌体。

        3. 加250 ul SolutionⅡ,来回颠倒4- 6次轻柔混匀,得到澄清的裂解液。

        4. 加125 ul Buffer N3,颠倒混匀几次直至出现白色絮状沉淀,室温放置2-3 min让其充分反应。

        5. 12 000×g 室温或4℃离心10 min得上清,把上清转移到一个新的离心管内;

        6. 加入与上清等体积的ETR Binding Buffer,颠倒混匀7-10次,室温放置5 min。

        7. 结合质粒——把结合柱插入2 ml收集管,每次转移700 ul混合液至结合柱柱里,8 000×g离心1 min,弃滤液。

        8. 重复第7步,直至所有上清都过滤完,弃滤液。

        9. 加入500 ul ETR Wash Buffer到结合柱上,8 000×g离心1 min,使全部液体滤过柱子,弃滤液。

        10. 加入500 ul Buffer EHB到结合柱上,8,000×g离心1min,使全部液体滤过柱子,弃滤液;

        11. 加入700 ul DNA Wash Buffer到结合柱上, 8 000×g离心1 min使全部液体滤过柱子,弃滤液;

        注意:浓缩的DNA Wash Buffer在使用之前必须按标签的提示用无水乙醇稀释。

        12. 加入700 ul DNA Wash Buffer到结合柱上,8 000×g离心1 min使全部液体滤过柱子,弃滤液;

        13. 把空柱子套回离心管,最大转速(不超过13 000×g)离心2 min干燥柱子;

        14. 把结合柱套在一个新的1.5 ml离心管中,加入30-50 ul Endotoxin-Free Elution Buffer,室温放置2-5 min,最高转速离心1 min洗脱质粒DNA。

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