原理
去垢剂裂解细胞法通常用于培养的动物细胞。典型的离子型去垢剂SDS(如2%SDS)能充分地裂解细胞。培养的动物细胞和细菌，如可以使用这种方式裂解。假如实验所用的抗体识别的抗原决定簇取决于自然空间构象，并对还原环境敏感，那么在裂解缓冲液中应除去二硫苏糖醇，并建议使用非还原/无脲的凝胶（Ji，et al，1997;Ji and Simpson,1999)。
材料与仪器
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 |
步骤
1.将1X107~5X107个细胞加到1ml含有100 mmol/L DDT的Laemmli样品缓冲液中。
2.由于DNA的释放，在Laemmli缓冲液中细胞裂解液变得很黏，克服黏性问题有2种方法：
(1)离心裂解液lOOOOOg，20 min，除去DNA;
(2)超声破碎裂解细胞，每次超声15?30s，共4次，每次之间将样品在冰上放置15s。
3.在95°C水浴加热样品5 min。
4.20000 g离心5 min。
5.转移上清到一个新管中。
6.样品（上清）现在可以用于电泳（见方案1)和免疫印迹（见HarlowandLane，1999)。在免疫印迹研究中，制备培养细胞提取物时，蛋白样品必须满足以下条件：
（1）溶于适合凝胶电泳系统的溶液中（如，溶液的pH值应该在7.0左右，并且盐浓度为200 mmol/L左右）；
（2）蛋白浓度不能超过特定凝胶系统的承载能力（凝胶电泳变量的讨论见第2章）。对于传统凝胶，小胶的每个泳道的上样量不能>150ug 的总蛋白。
来源：丁香实验
