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        SYPRO Ruby 荧光染色实验

        相关实验:单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

        最新修订时间:

        原理

        到目前为止,在常用来检测经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后的蛋白质的方法中,SYPRORUBY 可能是最灵敏的突光染色方法了,它能检测出仅含 1?2ng 蛋白的条带。遗憾的是,如此微量的蛋白条带经染色后用肉眼却不可见,需要一个荧光扫描仪检测(SYPRORuby 的最大激发光和发射光的波长分别是 280nm 和 450nm/610nm)。蛋白含量约 50ng 的条带在紫外透射光的帮助下肉眼可见。本方案是由 GenomicSolution 提供的 SYPRORuby 染色方法改写而来。这种方法也与质谱兼容。关于荧光检测技术,包括成像装置和检测设备等,请详阅 Patton(2000)。

        材料与仪器

        步骤

        1.电泳结束后,将凝胶置于盛有试剂 A 的塑料容器中,试剂 A 的量要足够覆盖整块凝胶。例如,一块典型的 mini 胶(8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的试剂 A。

        2.室温下摇动凝胶 30 min。

        3.弃去使用后的试剂 A,加入足够覆盖凝胶量的 SYPRORuby 染料,用铝箔遮盖好容器,室温下摇动凝胶 90 mm 至过夜。

        未使用过的 SYPRO Ruby 染料仅需染色约 2 h,突光扫描仪(MolecularDynamicsTyphoon8600 或类似产品)就能检测到 Ing 条带。若重复使用染料按步骤③染色 2 h,灵敏度将下降,只能检测到约 Sng 蛋白含量的条带。

        4.弃去 SYPRO Ruby 染料(或者保存起来以备后用,见步骤③的注解)。

        5.加人适量的试剂 B,室温下摇动 30~60 min。

        6.将荧光扫描仪设置在 523nm 处对凝胶扫描,或者将凝胶保存在适量的 2% 甘油中。

        凝胶在 2% 甘油中可保存 6 个月,而且荧光信号不会减弱。

        7.若要长期保存凝胶,应用干胶机或让凝胶在空气中干燥。若采用空气干燥凝胶,需将凝胶放在两张湿的玻璃纸中间,拉紧玻璃纸,待胶静置于空气中变干。空气干燥后的凝胶可永久保存

        来源:丁香实验

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