Percoll梯度法

1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。

2. 加入 10 ml Percoll 溶液，匀浆分离得到的染色质。

Percoll 溶液：

89% (v/v) Percoll

5 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

2 mmol/L EDTA

0.8 mmol/L 精胺

2 mmol/L 精咪

0.1 % 毛地黄皂苷

3. 再加 15 ml Percoll 溶液到匀浆中，充分混匀。

4. 将 35 ml 的 Percoll 混合物加入 50 ml 的聚碳酸酯离心管中，用一固定角度转头（Beckman Instruments) 在 4℃，20000 r/min 离心 30 分钟。

5. 吸出染色体带上面的全部物质，将梯度中的染色体回收于大约 10 ml 的 Percoll 溶液中。

6. 为了除去 Percoll 颗粒，以 1:2 比例用稀释缓冲液稀释染色体，1400 g 离心 45 分钟进行浓缩。