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        分离核仁

        相关实验:分离核仁实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 制备溶液:

        NKM:0.13 mol/L NaCl,5 mmol/L KCl,8 mmol/L MgCl2

        0.34 mol/L 蔗糖,3 mmol/L MgCl2

        2.3 mol/L 蔗糖,10 mmol/L MgCl2

        0.34 mol/L 蔗糖,0.05 mmol/L MgCl2

        0.88 mol/L 蔗糖

        2. (可选)用冰冷的 NKM 溶液灌注肝脏。

        3. 称组织重量,用剃刀或剪刀切成非常小的碎块,或者用组织压挤器进行压挤。

        4. 每克组织加 10 倍体积的含 0.34 mol/L 蔗糖和 3 mmol/L MgCl2 的溶液进行匀浆破碎细胞。

        5. 匀浆通过 4 层粗孔滤纸以去除结缔組织。

        6. 4℃,500 g 离心 10 分钟。

        7. 用紧密结合的 Teflon-玻璃匀浆器匀浆使细胞核粗品重悬浮于 10 倍体枳(每克起始组织)的含 2.3 mol/L 蔗糖,10 mmol/L MgCl2 的溶液中。

        8. 40000 g 离心 1 小时沉淀细胞核。

        9. (可选)温和地将细胞核沉淀重悬浮于 0.5 倍体积的含 0.34 mol/L 蔗糖,0.25% (w/v) Triton X-100 和 5 mmol/L MgCl2 的溶液中,500 g 离心 10 分钟得到沉淀。

        10. 将细胞核重悬浮于 0.16 倍体积的含 0.34 mol/L 蔗糖和 0.05 mmol/L MgCl2 的溶液中。

        11. 超声处理细胞核悬液 4 次,每次大约 10 秒钟。

        12. 在超声处理过的细胞核下面加一层含 0.88 mol/L 蔗糖和 0.05 mmol/L MgCl2 的溶液,2000 g 离心 30 分钟。

        13. 收集核仁沉淀。

        来源:丁香实验

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