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        从培养细胞或组织中制备细胞核基质/中间纤维骨架结构实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        从培养细胞中制备细胞核基质/中间纤维骨架结构

        1. 在 4℃ 用 PBS 洗细胞一次。 2. 在 4℃ 用含 0.5% Tritron X-100 的细胞骨架缓冲液抽提细胞 3 到 5 分钟。直到消化步骤,每 107 个细胞最少要用 1 ml 缓冲液,以后减半。 3. 在 4℃ 用抽提缓冲液抽提细胞 3~5 分钟。这一步去除组蛋白 H1 和除中间纤维蛋白之外的细胞骨架蛋白。另外,这一步也可在 DNA 酶消化步骤(第 4 步)之后作,这样也

        从组织中分离制备细胞核基质/中间纤维支架结构

        1. 在 4℃ 将新鲜组织切成 1 mm3 左右的小块。在 4℃,用 Teflon 研杵和 Doume 匀浆器在含 0.5% Tritron X-100 的细胞骨架缓冲液中对切碎的组织进行匀浆,直到没有可见的团块。每克组织用大约 10 ml 缓冲液。 含 0.5% Triton X-100 的细胞骨架缓冲液: 10 mmol/L PIPES,pH 6.8 300 mmoI/L 蔗糖 100

        细胞核的预先分离

        1. 在 4℃ 用 PBS 清洗细胞,用一医用台式离心机低速离心。然后用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液悬浮沉淀。每 107 个细胞用 1 ml 缓冲液。用 0.002 英寸间隙的 Dounce 匀浆器破碎细胞。 含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液: 10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4) 10 mmol/L NaCl 1.5 mmo

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