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        X射线片放射自显影检测32P标记的蛋白质

        相关实验:蛋白质磷酸化的测定实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 单向或双向凝胶电泳分辨 32P 标记的样品。

        2. Whatman 3MM 滤纸上或者两张塞璐玢膜(Bio-Rad) 之间吸干凝胶。用放射性墨水在凝胶边缘标几个点。

        3. 完全黑暗或安全光(用柯达 GBX-2 或 6B 滤光片遮光)下,在 X 射线片曝光夹里,将柯达 X-OMAT-AR 胶片放在凝胶与增感屏(DuPont Cnone) 之间。确保胶片与凝胶及增感屏的闪烁体面紧密接触。如果用到第二块增感屏,应将它放在凝胶的另一面,让凝胶与胶片夹在两块增感屏之间。用两块塑料板夹紧曝光夹,于 -70℃ 曝光。

        4. 冲洗 X 射线片,显影。

        5. 依放射性记号,在读片机里将考马斯亮蓝染色胶与放射自显影图排列好,鉴定磷酸化靶蛋白,拍照。

        6. 切下含靶蛋白的胶条,用液闪计数器检测磷酸化蛋白的放射性。

        来源:丁香实验

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