快速简便的转化法
最新修订时间：
材料与仪器
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 |
步骤
1. 将 10 μl 接种物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2，培养过夜。
2. 对一个转化来说，在微量离心管中用 1.0 ml 灭菌水悬浮一接种环酵母菌。
3. 离心沉淀细胞，将水去掉。
4. 用 500 μl 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞，30℃ 水浴 15 分钟。
5. 制备转化混合物：每个转化管加 240 μl PEG、36 μl 1.0 mol/L 的 LiAc、25 μl ssDNA、5.0 μl 质粒 DNA 和 45 μl 水。
6. 用微量离心机离心沉淀细胞，去掉 LiAc。
7. 向每个细胞沉淀中加入 350 μl 转化混合物，剧烈涡旋混匀。
8. 30℃ 水浴 30 分钟。
9. 42℃ 水浴热休克 20 分钟。
10. 用微量离心机最高速度离心 15 秒，去掉转化混合物。
11. 吸取 1.0 ml 灭菌水加到管中，上下吹打并剧烈涡旋以重悬细胞。
12. 吸取 100 μl 样品涂布 SC 减样选择培养基平板，30℃ 培养 2~4 天。
2. 对一个转化来说，在微量离心管中用 1.0 ml 灭菌水悬浮一接种环酵母菌。
3. 离心沉淀细胞，将水去掉。
4. 用 500 μl 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞，30℃ 水浴 15 分钟。
5. 制备转化混合物：每个转化管加 240 μl PEG、36 μl 1.0 mol/L 的 LiAc、25 μl ssDNA、5.0 μl 质粒 DNA 和 45 μl 水。
6. 用微量离心机离心沉淀细胞，去掉 LiAc。
7. 向每个细胞沉淀中加入 350 μl 转化混合物，剧烈涡旋混匀。
8. 30℃ 水浴 30 分钟。
9. 42℃ 水浴热休克 20 分钟。
10. 用微量离心机最高速度离心 15 秒，去掉转化混合物。
11. 吸取 1.0 ml 灭菌水加到管中，上下吹打并剧烈涡旋以重悬细胞。
12. 吸取 100 μl 样品涂布 SC 减样选择培养基平板，30℃ 培养 2~4 天。
来源：丁香实验
