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        分配96孔板上细胞用于冻存和体外分化

        相关实验:将基因转移至未分化 ES 细胞实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 准备下列试剂和材料:

        DMSO(组织培养级)

        平底 96 孔板

        多道移液器

        无菌多道移液器容器

        ES 生长培养基

        ES 分化培养基

        无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS

        胰酶溶液

        2X 冻存液

        2. PBS 冲洗 96 孔板上的 ES 细胞两次,200 μl/孔。

        3. 每孔中 40 μl 胰酶溶液,37℃ 孵育 5 分钟。显微镜下观察细胞脱落和分离情况。

        4. 胰酶消化的同时,准备 2X 细胞冻存液(FCS+ 20% DMSO)。

        5. 在胰酶消化细胞中加 60 μl 培养基,吹吸分散细胞。

        6. 在新的无菌 96 孔板每孔中加 50 μl 2X 细胞冻存液。

        7. 取 50 μl 胰酶消化的 ES 细胞,直接加入冻存液中,吹吸一次混匀。细胞转移到 -80℃ 冻存,直至鉴定出具有预期表型的克隆。

        8.  ES 分化培养基稀释剩余细胞,悬滴培养。

        9. 体外分化后,鉴定具有预期 lacZ 表型的克隆,融化相应的冻存细胞,用于进一步分析。

        来源:丁香实验

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