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        将ES克隆挑取到96孔板

        相关实验:将基因转移至未分化 ES 细胞实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 准备下列试剂和材料:

        ES 生长培养基,含 300 μg/ml G418 和青霉素/链霉素

        96 孔平底 neoR-MEF 滋养板

        96 孔 U-底板

        细而圆的无菌吸头

        微量移液器(10~100 μl)

        8 道移液器

        无菌多道移液器容器

        2. 在有 neoR-MEF 滋养层的平底 96 孔板的每孔中加 150 μl 含 G418 和青霉素/链霉素的 ES 培养基。置温箱待用。

        3. 在生物安全柜内的倒置显微镜下挑取克隆。

        4. 用多道微量移液器在 96 孔 U 底板每孔加 25 μl 胰酶溶液。

        5. PBS 冲洗含 ES 克隆的 100 mm 培养板两次。加 PBS,恰好没过培养板的底。

        6. 在显微镜下,用装有无菌超细吸头的微量移液器挑取 ES 克隆。破坏 ES 克隆周围的 MEF 细胞,将克隆吸入吸头,体积不要超过 20 μl。

        7. 克隆放入含胰酶的 96 孔培养板。

        8. 多道移液器吹吸 4 次,分散 ES 细胞,转移到从温箱中取出的 96 孔 neoR-MEF 滋养板,孵育过夜。

        9. 第二天换含 G418 和青霉素/链霉素的 ES 生长培养基,继续孵育。

        10. 细胞培养 5 天左右传代。每天更换含 G418 和青霉素/链霉素的培养基。

        来源:丁香实验

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