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        利用ABI377DNA测序仪进行凝胶电泳

        相关实验:细胞系的 DNA STR 谱

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 在烧杯中混合以下各成分,制备 4 % 聚丙烯酰胺凝胶(制胶材料:量筒、天平、过滤器(如 Sartolab 150 ml 滤器),真空泵、梳子、0.2 mm 胶隔板、磁力搅拌器、尿素(如 Fisher)、丙烯酰胺贮存液(如Bio-Rad 40 % 丙烯酰胺/BIS 19:1)、无菌纯水(如 Fisher AR 级水)、混合床基树脂(如 Sigma)、过硫酸铵(如 Sigma)、10× TBE (如 National Diagnostics)、TEMED (如 Sigma)):

        (a)尿素 18 g;

        (b)40 % 丙烯酰胺贮存液 5.2 ml;

        (c)水 27 ml;

        (d)混合床基树脂 0.5 g 。

        2. 灌胶。

        3. 参照技术手册,安装 ABI377 DNA 测序仪,准备跑胶。

        4. 从热循环仪中取出样品,制备上样混合物(甲醛、葡聚糖蓝色染料(试剂盒提供)、Gene Scan500(GS500 ROX)内尺寸标准(试剂盒提供)),每管如下:

        (a)甲醛 1.2 μl;

        (b)GS500 ROX 0.13 μl;

        (c)葡聚糖蓝色上样缓冲液 0.2 μl。

        5. 吸 1.5 μl 上样混合物,加入适当的管或板中。同时制备 2 个等位梯度(试剂盒提供)的上样混合物。向适当的管或板中加入 PCR 扩增产物或等位梯度,轻轻混合。

        6. 加热含 PCR 扩增产物的上样混合物,使 DNA 变性,95°C 约 3 min,立即移入冰浴中或设定在 0°C 的电子冰盒中。

        7. 参照 ABI 技术手册,完成 DNA 测序仪的安装,装上凝胶,从单数泳道开始上样。

        8. 跑胶需 2.5 h 。

        利用ABI377DNA测序仪进行凝胶电泳

        来源:丁香实验

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